異丙酚對大鼠內(nèi)臟抗傷害作用的脊髓機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 異丙酚是一種具有強(qiáng)效鎮(zhèn)靜作用的臨床最常用的靜脈麻醉藥。大量的動物實(shí)驗(yàn)和臨床研究均表明，異丙酚對傷害性刺激所引起的疼痛具有鎮(zhèn)痛作用。有證據(jù)顯示脊髓背角存在異丙酚的重要作用位點(diǎn)，但是否參與傷害信息的調(diào)節(jié)尚不清楚。脊髓接受外周感覺信號和信號上傳的過程都受到局部抑制性神經(jīng)元的調(diào)控，這種抑制作用部分由抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(glycine，Gly)介導(dǎo)。GABA是分布于哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的一種重要抑

2、制性神經(jīng)遞質(zhì)，GABA受體與其內(nèi)源性配體γ-氨基丁酸相結(jié)合產(chǎn)生抑制性突觸后電位( inhibitory postsynaptic potention，IPSP)。GABA受體至少有兩種受體亞型GABAA和GABAB。GABAA受體是GABA受體家族中的一類門控通道受體，GABAA受體被激活后產(chǎn)生快速型抑制性突觸后電位(fast IPSP)。GABAA受體是異丙酚的主要作用靶位之一。阿片受體于1973年被英美和瑞典等6家實(shí)驗(yàn)室先后報道并且

3、提取成功。隨后腦啡肽、內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽，以及其他具有阿片樣作用的肽類物質(zhì)也被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)。它們是一類具有嗎啡或鴉片樣作用的內(nèi)源性活性物質(zhì)，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于肽類，所以，稱為內(nèi)源性阿片肽。GABA和內(nèi)源性阿片肽是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)兩類主要的抑制性遞質(zhì)，通過結(jié)合相應(yīng)的受體在脊髓背角發(fā)揮抑制作用。那么，異丙酚在脊髓水平是否具有抗傷害作用?其作用機(jī)制是什么?
　　 因此，本實(shí)驗(yàn)采用鞘內(nèi)給藥的方法，通過一種新型的直腸粘膜下注射福爾馬林復(fù)制的內(nèi)臟痛動物

4、模型，用行為學(xué)及形態(tài)學(xué)的研究方法在脊髓水平來探討異丙酚的抗內(nèi)臟傷害作用機(jī)制是否涉及GABAA受體與阿片受體。該研究旨在增加對全麻藥物作用機(jī)制的認(rèn)識，同時也為臨床使用異丙酚提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1．行為學(xué)研究方法：56只成年雌性SD大鼠成功脊髓蛛網(wǎng)膜下腔（鞘內(nèi)）埋入導(dǎo)管并留置后隨機(jī)分為7組(n=8)：生理鹽水對照組(ND組)：鞘內(nèi)注射生理鹽水(NS)+二甲基亞砜(DMSO)10ul:異丙酚組（P1組）：鞘內(nèi)注

5、射異丙酚10ug:異丙酚組（P2組）：鞘內(nèi)注射異丙酚20ug;荷包牡丹堿(Bicuculline)對照組（B組）：鞘內(nèi)注射荷包牡丹堿0.2ug;荷包牡丹堿實(shí)驗(yàn)組（BP1組）：鞘內(nèi)預(yù)注荷包牡丹堿0.2ug，10分鐘后鞘內(nèi)注射異丙酚10ug;納洛酮(Naloxone)對照組(Na組)：鞘內(nèi)注射納洛酮2ug;納洛酮實(shí)驗(yàn)組（NaP1組）：鞘內(nèi)預(yù)注納洛酮2ug，10分鐘后鞘內(nèi)注射異丙酚10ug。采用七氟醚麻醉下直腸粘膜下注射福爾馬林復(fù)制的內(nèi)臟能動

6、物模型，清醒后鞘內(nèi)注射各組藥物并觀察大鼠行為學(xué)的變化，并且每15min進(jìn)行一次內(nèi)臟疼痛計分，共計1h。
　　 2．形態(tài)學(xué)研究方法：行為學(xué)觀察1h后，取脊髓L2-3節(jié)段，用免疫組化法觀測各組大鼠脊髓背角c-fos的表達(dá)，并計FOS免疫反應(yīng)樣神經(jīng)元(FOS-likeimmunoreactivity，F(xiàn)LI)陽性細(xì)胞數(shù)。
　　 統(tǒng)計處理：
　　 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS11.5進(jìn)行，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-x±s）表示

7、，行為學(xué)和形態(tài)學(xué)研究組內(nèi)比較采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析，組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，p＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1．行為學(xué)研究結(jié)果：ND組大鼠在注射福爾馬林后30min時達(dá)到內(nèi)臟疼痛評分的最大值，注射福爾馬林后45min至60min內(nèi)臟疼痛評分逐漸降低。60min內(nèi)，與ND組相比，P1組和P2組大鼠內(nèi)臟疼痛評分均顯著降低(p＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且P1組和P2組大鼠之間差

8、異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)；與P1組相比，BP1、NaP1組內(nèi)臟疼痛評分增加(p＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與B組相比，BP1組內(nèi)臟疼痛評分降低(p＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與Na組相比，NaP1組內(nèi)臟疼痛評分降低（p＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2．形態(tài)學(xué)研究結(jié)果：ND組大鼠脊髓背角可見大量的FLI陽性細(xì)胞數(shù)。與ND組相比，P1、P2組大鼠脊髓背角FLI陽性細(xì)胞數(shù)均明顯減少(p＜0.05)，差異有統(tǒng)計

9、學(xué)意義，且P1組和P2組大鼠脊髓背角FLI陽性細(xì)胞數(shù)之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）；與P1組相比，BP1、NaP1組大鼠脊髓背角FLI陽性細(xì)胞數(shù)增加(p＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與B組相比，BP1組大鼠脊髓背角FLI陽性細(xì)胞數(shù)降低(p＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與Na組相比，NaP1組大鼠脊髓背角FLI陽性細(xì)胞數(shù)降低(p＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1．異丙酚在脊髓水平對大鼠內(nèi)臟