SEPT9基因在人肝癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)差異及臨床意義.pdf

1、目的:SEPT9是廣泛存在于真核生物中的進(jìn)化上保守的細(xì)胞骨架GTPase蛋白Septin基因家族成員之一,其結(jié)構(gòu)特殊,且在多種腫瘤組織中存在表達(dá)差異,功能不盡相同,如SEPT9在乳腺癌中高表達(dá),促進(jìn)腫瘤增殖;在CRC中高甲基化,已經(jīng)作為篩選CRC的有效生物指標(biāo)應(yīng)用于臨床。這引起學(xué)界的注意,是現(xiàn)階段腫瘤相關(guān)研究的熱點基因。但該基因在肝癌中的表達(dá)及在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用尚不清楚。鑒于此,本研究通過研究SEPT9基因在人正常肝細(xì)胞株L02、惰

2、性轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株HepG2和人肝癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-H中的表達(dá)差異及其在正常肝組織和肝癌組織中的表達(dá)情況,探討SEPT9在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,為確立SEPT9成為預(yù)測肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的新的生物學(xué)指標(biāo)以及基因治療新靶點提供更充分的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:用半定量RT-PCR及Westernblot方法檢測人正常肝細(xì)胞株L02、惰性轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株HepG2、人肝癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97-H

3、三種不同轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞中SEPT9mRNA及其蛋白的表達(dá)情況。收集瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2010年3月至2012年12月間手術(shù)治療的原發(fā)性肝癌患者的蠟塊44例,同時收集病例的病歷資料和臨床資料,所有肝癌病例均經(jīng)病理證實,正常肝組織蠟塊7例,采用免疫組織化學(xué)法對正常肝組織及肝癌組織中SEPT9蛋白進(jìn)行定性、定位分析并比較,結(jié)合陽性表達(dá)率及染色強(qiáng)度分析其與臨床病理特征(如腫瘤的數(shù)目、大小、分化情況)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:1、RT-P

4、CR結(jié)果分析顯示:SEPT9mRNA與內(nèi)參基因GAPDH相對表達(dá)量在人正常肝細(xì)胞株L02中為0.2628±0.0760,人肝癌細(xì)胞株HepG2中為0.8963±0.8618,MHCC97-H中為2.1613±2.1613。SEPT9基因在HepG2中的表達(dá)比L02高2.41倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.05);SEPT9基因在MHCC97-H中的表達(dá)比L02高7.22倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002<0.05);SEPT

5、9基因在MHCC97-H中的表達(dá)比HepG2高1.41倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.018<0.05)。2、Westernblot結(jié)果顯示:Septin9蛋白與內(nèi)參GAPDH蛋白的相對表達(dá)量在人正常肝細(xì)胞株L02中為0.6200±0.0850,人肝癌細(xì)胞株HepG2中為1.0067±0.1106,MHCC97-H中為1.9300±0.2100。SEPT9蛋白在HepG2中的相對表達(dá)量比L02高0.62倍,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0

6、30<0.05);MHCC97-H中該蛋白的表達(dá)比L02高2.11倍,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.011<0.05);SEPT9蛋白在MHCC97-H中的表達(dá)比HepG2高0.92倍,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.019<0.05)。3、免疫組化結(jié)果顯示:1)SEPT9蛋白的棕黃色顆粒主要出現(xiàn)在胞質(zhì),主要在腫瘤區(qū)域,同時正常肝細(xì)胞也有部分表達(dá)。SEPT9蛋白在肝癌組織中表達(dá)陽性率70.45％(30/44),正常肝組織中表達(dá)陽性率14.

7、29%(1/7)。SEPT9蛋白在人肝癌組織中的表達(dá)高于人正常肝組織,有顯著統(tǒng)計學(xué)意義((χ2=5.272,P=0.022)。2)肝癌組織中,SEPT9的表達(dá)水平與臨床病理特征中腫瘤的轉(zhuǎn)移存在顯著相關(guān),轉(zhuǎn)移組SEPT9蛋白的表達(dá)高于無轉(zhuǎn)移組(χ2=7.176,P=0.007)。與患者性別、年齡、腫瘤的大小、數(shù)目、腫瘤分化程度、組織學(xué)類型、有無肝硬化等病理特征無關(guān)。
　　結(jié)論:1、SEPT9基因在肝癌細(xì)胞株中高表達(dá),其表達(dá)量與肝癌細(xì)