山羊地方性鼻內(nèi)腫瘤病毒陜西株序列分析及Gag和Su蛋白多克隆抗體的制備.pdf

1、羊地方性鼻內(nèi)腫瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus，ENTV)是羊地方性鼻內(nèi)腺瘤(Enzootic nasal adenocarcinoma，ENA)的病原，可導致鼻甲骨篩骨上皮細胞的致瘤性轉(zhuǎn)化。ENTV-1感染綿羊，ENTV-2感染山羊。因為缺少感染性分子克隆和無法培養(yǎng)病毒，ENTV在ENA發(fā)病機理中的作用尚未被完全揭示，GenBank中收錄的ENTV全基因組也很少。在中國該病主要流行于內(nèi)蒙古、湖南、四川、重慶

2、、陜西等多個省市。為了深入研究ENTV，本研究對陜西省疑似ENA的山羊進行診斷，建立了RT-PCR檢測方法，對陜西省不同地區(qū)的4株ENTV-2進行全基因分段克隆和序列分析，并制備了Gag和Su蛋白多克隆抗體，獲得如下研究結(jié)果:
　　1.對陜西省4個山羊養(yǎng)殖場發(fā)生腫瘤的羊通過臨床癥狀觀察，剖檢和病理學觀察，確定該病為山羊地方性鼻內(nèi)腺瘤。建立ENTV-2的RT-PCR方法，對臨床樣品進行檢測，陽性率為15.5％。
　　2.通過分

3、段克隆得到陜西省4株ENTV-2的全基因，進行序列比較分析。ENTV-2-Shaanxi1～4全基因和ENTV-2-SC株(登錄號:HM104174.1)全基因核苷酸相似度達到98.2～98.7％，和ENTV-2歐洲株(登錄號:AY197548.1)相似度達到89.6～89.8％。序列差異部分主要集中在LTR，gag的兩個可變區(qū)，Orf-x和env的跨膜區(qū)(Transmembraneregion，Tm)序列。大部分的氨基酸差異存在于Or

4、f-x，ENTV-2-Shaanxi株和ENTV-2-SC株的Orf-x均含有108個氨基酸，而ENTV-2歐洲株含有166個氨基酸。除了Orf-x，還有Gag蛋白的兩個可變區(qū)域，ENTV-2-Shaanxi1～4株的可變區(qū)1區(qū)有6個連續(xù)的脯氨酸殘基。囊膜蛋白的跨膜區(qū)，特別是胞質(zhì)尾區(qū)差異也較大，但胞質(zhì)尾部中的YXXM基序是很保守的，YXXM是PI3K的結(jié)合基序。遺傳進化分析表明4個Shaanxi株和已發(fā)表的2株ENTV-2親緣關(guān)系最近，