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文檔簡(jiǎn)介
1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus2,PCV2)是引起斷乳豬多系統(tǒng)衰竭綜合征等多種疾病的主要病原體,病毒的主要衣殼蛋白Cap在體外可自組裝成病毒樣顆粒。研究表明Cap蛋白與補(bǔ)體蛋白C1q膜受體gC1qR、動(dòng)力蛋白輕鏈DYNLL1等蛋白存在相互作用,影響病毒復(fù)制及細(xì)胞功能。關(guān)于Cap蛋白互作蛋白的研究有助于了解PCV2感染的分子機(jī)制。因此對(duì)PCV2病毒的Cap蛋白的互作蛋白的研究具有重要意義。
本研究根據(jù)Gen
2、Bank中PCV2基因序列,設(shè)計(jì)cap基因特異性引物,PCR擴(kuò)增該基因,構(gòu)建重組Cap蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-Cap,大量誘導(dǎo)表達(dá)、純化重組蛋白,免疫新西蘭大白兔,獲得Cap蛋白的多克隆抗體。設(shè)計(jì)一對(duì)包含attB重組位點(diǎn)的cap基因特異性引物,PCR擴(kuò)增獲得帶有attB1和attB2位點(diǎn)的cap基因片段,利用Gateway技術(shù)構(gòu)建真核穩(wěn)定表達(dá)質(zhì)粒pDEST-SFB-Cap,轉(zhuǎn)染PK-15豬腎細(xì)胞,利用嘌呤霉素篩選,獲得攜帶SF
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