Topo I在人病理性瘢痕組織中的表達(dá)及羥基喜樹堿對(duì)人病理性瘢痕成纖維細(xì)胞的作用.pdf

1、目的：病理性瘢痕的防治是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要課題，本研究通過比較病理性瘢痕與正常皮膚組織中DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topo I)是否存在差異，探討Topo I特異性抑制劑羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin,HCPT)對(duì)人病理性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的影響，細(xì)胞周期的影響及其對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用，以期了解HCPT對(duì)成纖維細(xì)胞的藥理作用。 方法：(1)手術(shù)切除的病理性瘢痕組織標(biāo)本21例(年齡18～40歲：男性15例，女性6例；病程

2、在燒傷創(chuàng)面愈合后6～9個(gè)月，在此期間沒有接受過針對(duì)瘢痕的各種治療)：同一病人多余的正常皮膚組織標(biāo)本21例作為對(duì)照組；采用免疫組化的方法檢測(cè)拓?fù)洚悩?gòu)酶I的表達(dá)。(2)體外培養(yǎng)人病理性瘢痕成纖維細(xì)胞。1)選取羥基喜樹堿2～1000ng/ml共10個(gè)藥物梯度，分別選取24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)3個(gè)時(shí)間段，采用MTT法檢測(cè)羥基喜樹堿對(duì)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。2)采用流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)羥基喜樹堿5個(gè)藥物濃度(31，63，125，250，500

3、ng/ml)處理24h后成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期的改變及凋亡的百分率。3)500ng/ml濃度的羥基喜樹堿干預(yù)24小時(shí)后采用DNA片段化分析方法研究其對(duì)病理性瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。 結(jié)果：(1)TopoI在人病理性瘢痕和正常皮膚組織的角質(zhì)形成細(xì)胞，成纖維細(xì)胞中均有表達(dá)。正常皮膚中，角質(zhì)形成細(xì)胞及成纖維細(xì)胞各有3例免疫組化陽性；病理性瘢痕組織中，角質(zhì)形成細(xì)胞及成纖維細(xì)胞各有7例和12例呈陽性。正常皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞TopoI陽性表

4、達(dá)率為14.3％，病理性瘢痕組織表達(dá)率為33.3％，差異無明顯不同(P=0.1473)；正常皮膚成纖維細(xì)胞TopoI陽性表達(dá)率為14.3％，病理性瘢痕陽性總表達(dá)率為57.1％，存在明顯差異(P=0.0038)。(2)1)羥基喜樹堿對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，并且有明顯的劑量依賴性(相關(guān)系數(shù)為0.8675，P=0.0024)。作用24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)，IC50分別為：233ng/ml，176ng/ml及103ng/ml，無明

5、顯時(shí)間依賴性。2)羥基喜樹堿能使S期細(xì)胞增多，并且能誘導(dǎo)人病理性瘢痕成纖維細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，在作用時(shí)間為24小時(shí)，藥物濃度達(dá)到250ng/ml時(shí)，細(xì)胞可出現(xiàn)明顯的凋亡峰，成纖維細(xì)胞隨羥基喜樹堿藥物濃度增加而凋亡增加。3)500ng/ml羥基喜樹堿藥物干預(yù)成纖維細(xì)胞24小時(shí)后，提取出來的DNA經(jīng)過1％瓊脂糖凝膠電泳，呈現(xiàn)為細(xì)胞凋亡后特異梯狀條帶。 結(jié)論：在病理性瘢痕組織成纖維細(xì)胞中，拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的表達(dá)明顯高于正常皮膚成纖維細(xì)胞；羥基喜