肝細(xì)胞肝癌中STAT3和c-myc作用的初步研究.pdf

1、目的：(1)檢測(cè)STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝癌SMMC-7721細(xì)胞以及肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)。 (2)抗體干預(yù)后觀察STAT3及c-myc對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖和凋亡的影響以及兩者的相互關(guān)系，探討兩者在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：(1)免疫細(xì)胞化學(xué)及RT-PCR方法觀察STAT3及c-myc在肝癌細(xì)胞SMMC-7721中的表達(dá)。 (2)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝細(xì)胞

2、肝癌組織中的表達(dá)。 (3)分別單獨(dú)應(yīng)用STAT3及c-myc的抗體及兩種抗體聯(lián)合應(yīng)用后，MTT法檢測(cè)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的增殖情況，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)STAT3及c-myc mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果: (1)STAT3及c-myc在肝癌細(xì)胞SMMC-7721中均有表達(dá)。STAT3蛋白和c-myc蛋白均主要表達(dá)于細(xì)胞漿。 (2)應(yīng)用抗STAT3抗體干預(yù)后檢測(cè)到肝癌細(xì)胞SMMC-

3、7721增殖受到抑制，呈現(xiàn)時(shí)間、劑量依賴性。20μg/mL處理組和40μg/mL處理組與10μg/mL處理組比較，抑制率具有顯著差異(p<0.05)。20μg/mL處理組和40μg/mL處理組比較，抑制率無(wú)顯著差異(p＞0.05)。 (3)應(yīng)用抗c-myc抗體干預(yù)后SMMC-7721細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞活力下降，呈現(xiàn)時(shí)間、劑量依賴性，20μg/mL處理組和40μg/mL處理組與10μg/mL處理組比較，抑制率具有顯著差異(P<

4、0.01)。20μg/mL處理組和40μg/mL處理組比較，抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 (4)聯(lián)合應(yīng)用抗STAT3及抗C-myc抗體干預(yù)后，MTT結(jié)果顯示對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用呈時(shí)間、劑量依賴性。在24h處理組和48h處理組，聯(lián)合應(yīng)用抗體對(duì)SMMC-7721細(xì)胞增殖的抑制率高于單用一種抗體處理組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜.05)。72h處理組與單用一種抗體處理組相比，抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 (5)流式細(xì)

5、胞術(shù)檢測(cè)顯示單獨(dú)應(yīng)用抗STAT3和抗c-myc抗體及兩者聯(lián)合應(yīng)用后，細(xì)胞的早期凋亡率從對(duì)照的0.88％增加到7.12％、10.6％和15.5％，晚期凋亡細(xì)胞比率從對(duì)照的1.00％增加到3.12％、5.32％和7.14％，聯(lián)合應(yīng)用抗STAT3及抗c-myc抗體處理的細(xì)胞凋亡率高于單用一種抗體處理組。 (6)RT-PCR檢測(cè)顯示應(yīng)用抗STAT3抗體作用于細(xì)胞48h，c-myc mRNA的表達(dá)下降；聯(lián)合應(yīng)用兩種抗體處理細(xì)胞48h，c-

6、myc mRNA的表達(dá)明顯降低，(7)聯(lián)合應(yīng)用抗體作用于細(xì)胞48h，RT-PCR檢測(cè)顯示STAT3 mRNA的表達(dá)較對(duì)照組降低。 (8)STAT3在33例肝細(xì)胞肝癌組織中表達(dá)，c-myc在32例肝細(xì)胞肝癌組織中表達(dá)，不同分化程度的肝細(xì)胞肝癌中STAT3，c-myc的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論: (1)肝癌細(xì)胞SMMC-7721中存在STAT3及c-myc信號(hào)的過(guò)度激活。 (2)抑制STAT3基因

7、或者c-myc基因以及同時(shí)抑制STAT3和c-myc基因可以抑制肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。提示STAT3基因和c-myc基因在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。 (3)STAT3和c-myc基因在人肝細(xì)胞肝癌組織中過(guò)表達(dá)，STAT3，c-myc的表達(dá)強(qiáng)度與肝細(xì)胞肝癌的病理分級(jí)呈正相關(guān)，提示STAT3和c-myc基因參與了肝癌的惡性轉(zhuǎn)化。 (4)抗STAT3抗體作用于肝癌SMMC-7721細(xì)胞，可以抑制c