STAT3基因RNAi和杠柳苷誘導肝癌細胞凋亡以及對STAT3信號通路的影響.pdf

1、目的：觀察STAT3基因特異性RNAi和杠柳苷對人肝癌細胞SMMC7721凋亡的影響，分析其對SMMC7721細胞STAT3信號轉(zhuǎn)導通路的調(diào)控作用和對STAT3信號轉(zhuǎn)導相關分子基因表達的影響，為STAT3信號通路的腫瘤靶向治療提供理論依據(jù)。 方法： 1.采用RNAi技術，特異性沉默SMMC7721細胞中STAT3的表達，通過Western blot技術和半定量RT-PCR法檢測經(jīng)RNAi作用后SMMC7721細胞STAT

2、3表達水平的變化。 2.采用透射電鏡和流式細胞技術分析經(jīng)RNAi特異性沉默SMMC7721細胞中STAT3的表達后，對細胞凋亡的影響。通過半定量RT-PCR法檢測細胞凋亡相關因子bcl-2和survivin基因表達的變化。 3.以不同濃度的杠柳苷(2.5、5.0、10.0μg/ml)干預SMMC7721細胞，并設空白對照。干預12、24、48小時后，分別用MTT比色法分析細胞增殖情況。 4.通過半定量RT-PCR

3、法檢測2.5μg/ml杠柳苷作用不同時間(12、24、48h)后，SMMC7721細胞STAT3基因表達水平的變化。 5.應用流式細胞技術分析2.5μg/ml杠柳苷作用于SMMC7721細胞不同時間(12、24、48h)后，對細胞凋亡的影響。采用半定量RT-PCR法檢測杠柳苷對SMMC7721細胞凋亡相關因子bcl-2和survivin基因表達的影響。 結果： 1.STAT3基因特異性RNAi可有效沉默SMMC7

4、721細胞中STAT3的表達。 2.STAT3的表達被RNAi特異性沉默后，SMMC7721細胞凋亡的百分比明顯增加，與對照組相比有顯著性差異。bcl-2和survivin mRNA的表達水平均受到明顯抑制，與對照組相比有顯著性差異。 3.與對照組相比較，杠柳苷各實驗組SMMC7721細胞增殖水平明顯下降。并且隨藥物濃度的增加和作用時間的延長抑制作用增強，2.5μg/ml杠柳苷作用24h對細胞的抑制率可達到48.31％。

5、 4.半定量RT-PCR分析結果顯示，杠柳苷處理后，SMMC7721細胞中STAT3mRNA的表達水平明顯降低，與對照組相比有顯著性差異。 5.杠柳苷可顯著增加SMMC7721細胞凋亡的百分比，2.5μg/ml的杠柳苷作用12h、24h、48h的SMMC7721細胞凋亡率較對照組相比明顯增高，有顯著性差異。杠柳苷處理后，SMMC7721細胞bcl-2、survivinmRNA表達受到明顯抑制，與對照組相比有顯著性差異。

6、 結論： 1.STAT3基因特異性RNAi可有效沉默SMMC7721細胞中STAT3的表達。 2.STAT3基因特異性RNAi可誘導SMMC7721細胞凋亡，并下調(diào)SMMC7721細胞bcl-2、survivin mRNA的表達。 3.杠柳苷可明顯抑制SMMC7721細胞的增殖。 4.杠柳苷可抑制SMMC7721細胞中STAT3的表達。 5.杠柳苷可誘導SMMC7721細胞凋亡，下調(diào)SMMC