siRNA對(duì)前列腺癌細(xì)胞中Stat3作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文研究目的在于探討RNA干擾抑制Stat3表達(dá)的作用，及siRNA抑制Stat3表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響和在成瘤裸鼠體內(nèi)的作用。通過設(shè)計(jì)針對(duì)Stat3的特異性siRNA并轉(zhuǎn)染入前列腺癌細(xì)胞，觀察其對(duì)Stat3表達(dá)的抑制作用及對(duì)細(xì)胞生長、增殖及凋亡的影響，進(jìn)一步構(gòu)建表達(dá)Stat3-shRNA的載體系統(tǒng)，觀察對(duì)裸鼠移植瘤的治療作用，并轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞形成穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞，觀察其對(duì)細(xì)胞的作用及裸鼠的致瘤作用。 本文篩選出的si

2、RNA序列，采用以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的人U6RNA聚合酶Ⅲ啟動(dòng)子系統(tǒng)pSilencerTM2.1-U6，構(gòu)建Stat3特異發(fā)夾狀siRNA的表達(dá)載體，雙酶切及測(cè)序鑒定重組體，并轉(zhuǎn)染入PC-3細(xì)胞，G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞，熒光定量PCR及Westernblot檢測(cè)Stat3mRNA和蛋白的表達(dá)，MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。揭示了Stat3-shRNA表達(dá)載體對(duì)裸鼠體內(nèi)移植瘤具治療作用，可抑制腫瘤生長，與對(duì)照組具顯著差異(p＜