糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討.pdf

1、目的:糖皮質(zhì)激素(GC)誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡是糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松(GIOP)的主要細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。最近的研究發(fā)現(xiàn),金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)可抗鼠骨髓間質(zhì)細(xì)胞系MBA-1(前成骨細(xì)胞)的凋亡。所以,我們測試了地塞米松(Dex)對小鼠胚胎成骨細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞中TIMP-1的影響,探討GC誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　方法:小鼠胚胎成骨細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞放入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基及環(huán)境中培養(yǎng),以10-6~10-9

2、mol/L Dex(Dex干預(yù)組)、10-6mol/LDex+10-5mol/L糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU486(GR拮抗劑組)、200~1000ng/ml TIMP-1+10-6mol/L Dex(TIMP-1干預(yù)組)干預(yù)。對Dex干預(yù)組及GR拮抗劑組應(yīng)用實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTQ-PCR)檢測TIMP-1 mRNA的表達(dá);用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Westernblot)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測細(xì)胞和培養(yǎng)基中的TI

3、MP-1蛋白水平。應(yīng)用細(xì)胞凋亡ELISA試劑盒和酶底物法分別檢測Dex干預(yù)組及TIMP-1干預(yù)組的胞質(zhì)核小體及半胱天冬酶-3(Caspase-3)的活化水平。
　　結(jié)果:1.RTQ-PCR結(jié)果表明,Dex降低了MC3T3-E1細(xì)胞TIMP-1 mRNA的表達(dá)水平,并呈劑量依賴效應(yīng)。2.蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示,Dex抑制MC3T3-E1細(xì)胞TIMP-1蛋白的表達(dá),并呈劑量和時間依賴效應(yīng)。3.TIMP-1 ELISA檢測結(jié)果顯示

4、,Dex抑制MC3T3-E1細(xì)胞TIMP-1的分泌,并呈劑量和時間依賴效應(yīng)。4.利用GR拮抗劑米非司酮(RU486)探討Dex是否通過GR途徑介導(dǎo)TIMP-1的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)10-5M RU486可拮抗Dex對TIMP-1的抑制作用。5.Dex誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞凋亡,并呈劑量依賴效應(yīng)。6.重組TIMP-1可減少Dex(10-6mol/L)誘導(dǎo)的MC3T3-E1細(xì)胞凋亡,呈劑量依賴效應(yīng)。
　　結(jié)論:GC如Dex抑制成骨細(xì)胞TI