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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分
目的:研究β-catenin與Cyclin D1蛋白在腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)及其生物學(xué)意義。
方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC 法檢測(cè)49例腦膠質(zhì)瘤組織和5例正常腦組織中β-catenin和Cyclin D1的蛋白表達(dá)。
結(jié)果:在正常腦組織和腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中,β-catenin蛋白陽(yáng)性的比例分別為2/5和38/49(p<0.01),Cyclin D1蛋白陽(yáng)性的比例分別為1/5和42/49(p<0.
2、01);比較β-catenin和Cyclin D1在腦組織、低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤和高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中的光密度值,發(fā)現(xiàn)各組之間均存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0 05),其中各級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組與正常腦組織對(duì)照組之間有極顯著性差異(p<0.01);β-catenin的過(guò)度表達(dá)與Cyclin D1的過(guò)度表達(dá)顯著相關(guān)(r=0.6395,p<0 05)。
結(jié)論:β-catenin 參與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生,并有可能通過(guò)Cyclin D1 使細(xì)胞增殖,促使腫
3、瘤發(fā)生。
第二部分
目的:探討ES 以及ES 聯(lián)合阿霉素對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株GL15 增殖和凋亡的影響。
方法:通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,將pcDNA 3.1 ES 轉(zhuǎn)染入腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株GL15中,行穩(wěn)定篩選,然后運(yùn)用MTT 法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)ES 及ES和阿霉素聯(lián)合作用對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株GL15 增殖和凋亡的影響。
結(jié)果:MTT 法表明轉(zhuǎn)染pcDNA 3.1 ES 后阿霉素對(duì)GL1
4、5 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用明顯增強(qiáng),細(xì)胞增殖明顯減慢,差異具有顯著性(P<0.05);流式細(xì)胞儀表明,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1 ES 后,G0/G1 期細(xì)胞明顯增加(P<0.05),S 期細(xì)胞明顯減少(P<0.01),凋亡率明顯上升(P<0.01);聯(lián)合阿霉素治療后,上述差異更加顯著(P<0.01)。
結(jié)論:ES 聯(lián)合ADM 可明顯抑制人腦膠質(zhì)瘤GL15 細(xì)胞株的生長(zhǎng),二者聯(lián)用可以產(chǎn)生協(xié)同抗瘤作用。
第三部分
5、 目的:探討在轉(zhuǎn)染內(nèi)皮抑素質(zhì)粒后,GL15 細(xì)胞株中β-catenin蛋白和Cyclin D1蛋白表達(dá)的變化。
方法:通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的方法,將人內(nèi)皮抑素質(zhì)粒(PCDNA-ES 3.1,氨卞抗性)轉(zhuǎn)染入GL15 細(xì)胞株中,行穩(wěn)定篩選后,運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后β-catenin蛋白和Cyclin D1蛋白表達(dá)的變化,并分析其中的差異。
結(jié)果:對(duì)照組細(xì)胞爬片中β-catenin和Cyclin D1的平
6、均光密度值分別為0.3758±0.0371和0.4092±0.0417,而內(nèi)皮抑素質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分別為0.2462±0.0275和0.2046±0.0357;空白對(duì)照組中β-catenin和Cyclin D1的平均光密度值均高于內(nèi)皮抑素轉(zhuǎn)染組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明在不同組別之間,β-catenin的平均光密度值有顯著性差異,其中Cyclin D1的平均光密度值有極顯著性差異。
7、 結(jié)論:內(nèi)皮抑素可抑制GL15 細(xì)胞株中β-catenin蛋白的過(guò)度表達(dá)和異位表達(dá),并通過(guò)直接和間接的途徑,抑制cyclin D1蛋白的過(guò)度表達(dá),從而發(fā)揮抑制腫瘤發(fā)展的作用。
第四部分
目的:探討內(nèi)皮抑素基因聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療對(duì)GL15 裸鼠移植瘤的治療效果。
方法:將人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(GL15)移植于裸鼠皮下,成功建立裸鼠腦膠質(zhì)瘤模型,分別運(yùn)用內(nèi)皮抑素,環(huán)磷酰胺以及兩者聯(lián)合治療,觀(guān)察其對(duì)移植瘤生
8、長(zhǎng)的影響。
結(jié)果:在試驗(yàn)開(kāi)始前,各組動(dòng)物的皮下腫瘤體積分別為63.09±9.95mm3,61.42±6.07mm3,60.59±4.21mm3,62.22±7.10mm3;在治療試驗(yàn)后第6天,各組的皮下腫瘤體積分別為138.04±10.06mm3,108.61±8.57mm3,123.85±18.32mm3,103.26±
8.32mm3;在治療試驗(yàn)后第14天,各組的皮下腫瘤體積分別為450.12±73.23
9、 mm3,180.06±16.27mm3,322.69±99.40mm3,154.91±16.79mm3;在治療試驗(yàn)后第22天,各組的皮下腫瘤體積分別為2003.96±257.93 mm3,176.61±30.13mm3,844.67±110.44mm3,146.4±8.30mm3;在治療試驗(yàn)后第28天,各組的皮下腫瘤體積分別為4267.96±313.59 mm3,156.76±13.19 mm3,1609.77±113.19 mm3,
10、134.52±10.38mm3。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明,在治療前,各組動(dòng)物的皮下腫瘤模型體積之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p﹥0.05),內(nèi)皮抑素治療組以及聯(lián)合治療組從第6天開(kāi)始,分別與對(duì)照組和單純化療組出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05),從第14天開(kāi)始出現(xiàn)極顯著性差異(p<0.01),兩者之間在第22天出現(xiàn)顯著性差異(p<0.05);單純化療組從第22天開(kāi)始與對(duì)照組出現(xiàn)之間顯著性差異(p<0.05)。內(nèi)皮抑素治療組和聯(lián)合治療組的β-catenin和Cycl
11、in D1的光密度值均與對(duì)照組和單純化療組之間有極顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01),內(nèi)皮抑素治療組與聯(lián)合治療組之間的Cyclin D1 光密度值也有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。
結(jié)論:內(nèi)皮抑素可以有效抑制腦膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng),與環(huán)磷酰胺的聯(lián)合運(yùn)用可以增強(qiáng)其治療效果。其作用機(jī)制可能是1.內(nèi)皮抑素直接抑制腫瘤新生血管生成;2.內(nèi)皮抑素通過(guò)直接調(diào)節(jié)β-catenin和Cyclin D1的表達(dá),以及間接調(diào)節(jié)Cyclin D1的表達(dá)
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