PomGnT1在膠質(zhì)瘤中惡性作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究PomGnT1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與膠質(zhì)瘤惡性作用的相關(guān)性。探討PomGnT1在膠質(zhì)瘤中發(fā)揮惡性作用的細(xì)胞行為學(xué)現(xiàn)象，揭示PomGnT1參與膠質(zhì)瘤惡性作用的分子生物學(xué)機(jī)制，為未來(lái)開(kāi)發(fā)潛在的膠質(zhì)瘤治療靶向藥物提供理論依據(jù)。
　　方法:通過(guò)免疫組化檢測(cè)PomGnT1蛋白在133例不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織芯片中的表達(dá)情況;Kruskal-WallisH檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析研究PomGnT1與膠質(zhì)瘤的級(jí)別相關(guān)性;受試者工作

2、特征曲線(xiàn)(ROC)用于分析PomGnT1在膠質(zhì)瘤級(jí)別中的診斷價(jià)值。通過(guò)組織蛋白芯片、生物數(shù)據(jù)庫(kù)分析、免疫組化及K-M生存分析法對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和本單位中的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)組織樣本進(jìn)行生存分析，研究PomGnT1mRNA和蛋白表達(dá)水平與GBM生存預(yù)后的相關(guān)性。構(gòu)建PomGnT1過(guò)表達(dá)及敲弱U87、U251穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，進(jìn)一步通過(guò)侵襲實(shí)驗(yàn)、增殖實(shí)驗(yàn)和粘附實(shí)驗(yàn)研究PomGnT1在U87、U251細(xì)胞系中的惡性生物學(xué)行為。建立原位腦膠質(zhì)瘤動(dòng)

3、物模型，MR磁共振成像觀察成瘤大小，并進(jìn)行動(dòng)物的生存分析。通過(guò)westernblotting、ChIp實(shí)驗(yàn)研究PomGnT1的上下游分子信號(hào)通路。
　　結(jié)果:PomGnT1的表達(dá)與膠質(zhì)瘤的級(jí)別呈正相關(guān)，并且能夠作為鑒別低級(jí)別膠質(zhì)瘤和高級(jí)別膠質(zhì)瘤的診斷指標(biāo);在GBM中，PomGnT1高表達(dá)，且與GBM患者的生存預(yù)后相關(guān)。PomGnT1表達(dá)高，則GBM患者的生存時(shí)間減少。通過(guò)將PomGnT1過(guò)表達(dá)與敲弱的U87、U251穩(wěn)轉(zhuǎn)株的細(xì)胞行

4、為學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):PomGnT1能夠促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲、增殖，抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的粘附行為。在原位腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物活體上，PomGnT1能夠促進(jìn)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)，并且與動(dòng)物的預(yù)后相關(guān)。分子水平上，EGFR通路能夠促進(jìn)PomGnT1表達(dá)，且PomGnT1受到轉(zhuǎn)錄因子USF2調(diào)控;下游通路中，PomGnT1能夠抑制RPTPβ，進(jìn)而使得β-catenin被磷酸化激活，活化位點(diǎn)涉及到β-catenin的酪氨酸654和333殘基。最后，β-catenin的激活