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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
周圍神經(jīng)損傷是臨床常見(jiàn)病,常常導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)支配區(qū)域功能損害。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用過(guò)表達(dá)的CDNF在大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型中,探討聯(lián)合應(yīng)用人工神經(jīng)導(dǎo)管和CDNF基因治療對(duì)周圍神經(jīng)再生的作用。
方法:
在本研究中,我們將神經(jīng)導(dǎo)管的導(dǎo)向作用與重組CDNF慢病毒載體聯(lián)合起來(lái)治療坐骨神經(jīng)損傷。首先,構(gòu)建表達(dá)重組CDNF慢病毒載體,應(yīng)用大鼠神經(jīng)坐骨神經(jīng)缺損模型,觀察神經(jīng)導(dǎo)管和CDNF對(duì)坐骨神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的影響。
2、> (1)術(shù)后2、4、6、8周時(shí)間點(diǎn),檢測(cè)大鼠足跡并計(jì)算坐骨神經(jīng)功能指數(shù)。
(2)術(shù)后4周,取坐骨神經(jīng)再生段遠(yuǎn)端1cm的坐骨神經(jīng),液氮保存后Westernblot檢測(cè)各組CDNF蛋白的表達(dá)水平。
(3)在術(shù)后4、8周時(shí)間點(diǎn),取大鼠再生坐骨神經(jīng)和正常神經(jīng)做HE染色,觀察神經(jīng)組織學(xué)大致形態(tài)。應(yīng)用免疫組化技術(shù)染色S100蛋白以顯示髓鞘,染色NF200蛋白以顯示軸突。
(4)在術(shù)后8周時(shí)間點(diǎn),掃描電鏡觀察再生的神
3、經(jīng),對(duì)再生髓鞘的厚度進(jìn)行測(cè)量分析。
(5)在術(shù)后4、8周,取手術(shù)側(cè)腓腸肌稱重分析,評(píng)估坐骨神經(jīng)恢復(fù)水平。
結(jié)果:
(1)在術(shù)后4周時(shí)間點(diǎn),重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組損傷神經(jīng)遠(yuǎn)端高表達(dá)CDNF蛋白。
(2)在術(shù)后4周和8周時(shí)間點(diǎn),HE常規(guī)染色與S100和NF200免疫組化顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組再生的神經(jīng)在形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)出更規(guī)則有序的形態(tài)和良好的軸突再生。
(3)透射電鏡下重組CD
4、NF慢病毒載體應(yīng)用組在8周時(shí)神經(jīng)的超微結(jié)構(gòu)與正常神經(jīng)更為類似,再生髓鞘厚度顯著優(yōu)于對(duì)照組。
(4)腓腸肌濕重測(cè)量顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組明顯減輕肌肉萎縮。大鼠坐骨神經(jīng)功能指數(shù)分析結(jié)果顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組,大鼠后肢功能恢復(fù)明顯優(yōu)于對(duì)照組。
結(jié)論:
實(shí)驗(yàn)證實(shí)CDNF慢病毒載體的基因治療在神經(jīng)損傷段提供一個(gè)穩(wěn)定持續(xù)的CDNF表達(dá),再生的坐骨神經(jīng)在形態(tài)學(xué)和功能學(xué)上表現(xiàn)出良好的修復(fù),明顯促進(jìn)坐骨神
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