阿魏酸鈉對(duì)博萊霉素所致的大鼠肺纖維化干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：肺纖維化是以彌漫性、進(jìn)行性肺間質(zhì)纖維增生和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂并最終導(dǎo)致肺功能障礙為特點(diǎn)的疾病，是多種肺部疾病發(fā)展到晚期的共同結(jié)局。其病因各異，發(fā)病機(jī)制也不完全清楚，仍沒有令人滿意的治療方法。臨床上仍以糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒性藥物為主，但療效不確切，且副作用明顯。因此，尋找治療肺纖維化安全有效方法是當(dāng)前迫切需要解決的問題。目前探索能夠有效調(diào)節(jié)關(guān)鍵性細(xì)胞因子的活性，使細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積與降解趨于平衡的藥物已經(jīng)成為抗纖維化研究的方向之一。本

2、實(shí)驗(yàn)的目的是應(yīng)用阿魏酸鈉干預(yù)博萊霉素(BLM)誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型，觀察干預(yù)前后不同時(shí)間點(diǎn)肺泡炎、肺纖維化程度以及肺組織TGF-β1、TIMP-1和ET-1、SOD的表達(dá)及含量變化，探討阿魏酸鈉對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠肺纖維化的保護(hù)作用及其可能的相關(guān)機(jī)制，為臨床治療提供新的思路。 方法：42只SD清潔級(jí)雄性大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)6只、BLM模型組(B組)18只和阿魏酸鈉干預(yù)組(C組)18只三組。模型組和干預(yù)組又各分為7天、14天

3、和28天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)組。模型組和干預(yù)組采用經(jīng)一次性氣管內(nèi)注入BLMA5誘導(dǎo)大鼠肺纖維化模型，正常對(duì)照組在相同條件下給予等量的生理鹽水氣管內(nèi)滴注。干預(yù)組造模后第二天給予阿魏酸鈉35mg/kg灌胃。模型組和干預(yù)組于造模后7天(B7組和C7組)、14天(B14組和C14組)和28天(B28組和C28組)隨機(jī)處死6只。對(duì)照組于14天時(shí)處死。取右肺組織，用多聚甲醛溶液固定、常規(guī)石蠟包埋、切片，分別應(yīng)用HE染色和Masson染色，觀察肺泡炎和肺纖維化

4、的動(dòng)態(tài)變化，并進(jìn)行Szapiel病理分級(jí)；用免疫組化檢測(cè)技術(shù)觀察各組大鼠TGF-β1、TIMP-1表達(dá)的變化。左肺組織勻漿后用于檢測(cè)內(nèi)皮素-1(ET-1)、羥脯氨酸(HYP)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。 結(jié)果： 1.肺組織中HYP的含量(μg/mg)：B7組和C7組HYP含量分別為(1.264±0.13)和(1.291±0.15)與A組(1.15±0.11)兩兩比較差異均無顯著性(P>0.05)；B14組(1.925±

5、0.22)、B28組(2.546±0.15)較A組均明顯升高(P<0.01)；C14組HYP含量為(1.736±0.21)、C28組為(1.889±0.16)，顯著低于相應(yīng)的BLM組(P<0.01)，但仍較A組明顯升高(P<0.05)。2.肺組織SOD的活力(U/mgprot)：B7組SOD活力(44.54±5.77)較A組(76.72±4.87)顯著降低(P<0.01)；之后活力有所回升，B14組SOD活力為(57.73±4.04)仍

6、顯著低于A組(P<0.01)，B28組(72.24±3.06)與A組無顯著差異(P>0.05)。C7組SOD活力(58.10±4.91)較B7明顯升高(P<0.01)，但活力仍較A組明顯降低(P<0.01)。C14組(63.09±4.95)較B14組有所增高，但兩者差異無顯著性(P>0.05)；C28組(72.17±3.71)仍維持于較高水平，與B28、A組均無顯著差異(P>0.05)。4.肺組織ET-1的含量(pg/mg prot)：

7、B7組為(317.988±20.95)較A組(123.673±16.67)顯著增高(P<0.01)；之后隨病程進(jìn)一步增高，B14組ET-1含量(358.992±24.98)達(dá)高峰，后略有下降， B28天組(274.414±27.28)仍顯著高于A組(P<0.01)。C組中C7組(172.663±18.29)較B7組明顯降低(P<0.01)，但仍顯著高于A組(P<0.01)。C14組(239.585±29.16)較B14組亦有明顯降低(P

8、<0.01)，但較A組仍明顯升高(P<0.01)；C28組(237.973±24.91)與B28組比較顯著降低(P<0.05)，仍顯著高于A組(P<0.01.)。5.病理結(jié)果：B組大鼠表現(xiàn)出肺泡炎和纖維化的病理過程，證明造模成功。C組大鼠肺泡炎和肺纖維化的程度均較B組減輕，將肺泡炎和肺纖維化程度分級(jí)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，C7、C14組肺泡炎程度較B7、B14組顯著減輕(P<0.05)，C28組肺纖維化程度較B28組顯著減輕(P<0.05)。

9、6.肺組織中TGF-β1表達(dá)的變化：免疫組化結(jié)果顯示，A組在少數(shù)支氣管粘膜上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞處弱陽(yáng)性表達(dá)。B組，除在上述細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)外，在增厚的肺泡間隔及肺實(shí)變區(qū)出現(xiàn)大量的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，巨噬細(xì)胞、成纖維樣細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)。C組陽(yáng)性表達(dá)的部位與B組相似，但陽(yáng)性表達(dá)的面積明顯減少，強(qiáng)度也明顯減弱。半定量分析結(jié)果：B7組(4.57±0.46)表達(dá)明顯高于A(1.75±0.59)組(P<0.01)，之后逐漸增高，B14組(6.20±0

10、.36)達(dá)高峰，以后表達(dá)有所減低， B28組為(3.68±0.44)，較A組仍顯著增高(P<0.01)。經(jīng)干預(yù)后，C組表達(dá)較B組減低，其中C7(3.82±0.26)、C14組(5.37±0.55)較相應(yīng)的B7、B14組顯著降低(P<0.05)，仍明顯高于A組(P<0.01)。C28組(3.32±0.29)與B28組無顯著差異(P>0.05)。7.肺組織中TIMP-1表達(dá)的變化：A組只在少數(shù)肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、間質(zhì)巨噬細(xì)胞，弱陽(yáng)

11、性表達(dá)。B組中除上述細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng)外，成纖維細(xì)胞灶、巨噬細(xì)胞及肺實(shí)變區(qū)內(nèi)均有強(qiáng)表達(dá)。C組各時(shí)段陽(yáng)性表達(dá)部位與B組相同，陽(yáng)性表達(dá)范圍及表達(dá)強(qiáng)度均低于B組。半定量分析結(jié)果：B7組(2.67±0.40)表達(dá)高于A組(2.18±0.48)，但差異無顯著性(P>0.05)，B14組(5.10±0.40)表達(dá)逐漸增高，顯著高于A組(P<0.01)，至B28組(6.18±0.34)達(dá)高峰。經(jīng)干預(yù)后，C組表達(dá)較B組減低，其中C28組(5.38±0.4

12、3)較B28組顯著降低(P<0.05)，仍顯著高于A組(P<0.01)，C7(2.65±0.35)、C14組(4.58±0.39)雖然較相應(yīng)的B7、B14組表達(dá)有所降低，但差異無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：1.在BLM所致大鼠肺纖維化過程中，肺組織SOD活性下降，ET-1含量增高，以及肺組織內(nèi)TGF-β1、TIMP-1的表達(dá)增高；2.早期應(yīng)用阿魏酸鈉能夠減輕BLM所致的肺纖維化大鼠肺泡炎及纖維化的程度，可以下調(diào)BLM誘發(fā)的大