氨基胍和厄多司坦對博萊霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：肺纖維化是以彌漫性、進(jìn)行性肺間質(zhì)纖維增生和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，最終導(dǎo)致肺功能障礙為特點的疾病，是多種肺部疾病發(fā)展到晚期的共同結(jié)局。其預(yù)后差，病死率高，仍沒有令人滿意的治療方法。臨床上仍以糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒性藥物為主，但療效不確切，且副作用明顯。因此，尋找治療肺纖維化安全有效方法是國內(nèi)外研究的熱點。本實驗用氨基胍及氨基胍聯(lián)合厄多司坦來干預(yù)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠，通過測大鼠肺功能指標(biāo)：肺活量、肺順應(yīng)性，不同時間點肺泡炎、肺纖維化程度，羥

2、脯氨酸(HYP)含量，并與傳統(tǒng)的激素治療方法對比，評價其治療肺纖維化的效果，及其是否有協(xié)同作用。通過測肺組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活力，肺組織勻漿中丙二醛(MDA)的含量及髓過氧化物酶(MPO)的含量，探討此兩種藥對肺纖維化可能的作用機(jī)制。 方法：選取清潔級健康雄性SD大鼠78只，體重250±10g，將其隨機(jī)分為五組：(1)正常對照組(A)組：6只，生理鹽水氣管內(nèi)滴入和灌胃，假手術(shù)后第14天全部處死。(2)博萊霉素組(B

3、)組：18只，氣管內(nèi)一次性注入0.2-0.3ml博萊霉素BLM(5mg/kg)制造肺纖維化模型，以生理鹽水灌胃。于造模后第7、14、28天各處死6只，分別為B7、B14、B28組。(3)地塞米松組(C)組：18只，氣管內(nèi)注入0.2-0.3mlBLM(5mg/kg)制造肺纖維化模型，造模后第2日開始腹腔注射地塞米松(1mg/kg)一日一次，直至處死，與造模后第7、14、28天各處死6只，分別為C7、C14、C28組。(4)氨基胍組(D)組

4、：18只，氣管內(nèi)注入0.2-0.3ml BLM(5mg/kg)制造肺纖維化模型，于造模開始前兩天開始腹腔注射氨基胍(50mg/kg)，一日一次，直至處死，于造模后第7、14、28天各處死6只，分別D7、D14、D28為組。(5)氨基胍+厄多司坦組(E)組：18只，氣管內(nèi)注入0.2-0.3mlBLM(5mg/kg)造模，于造模開始前兩天開始腹腔注射氨基胍(50mg/kg)，一日一次，并于造模開始前兩天開始用厄多司坦(10mg/kg/天)灌

5、胃，直至處死，于造模后第7、14、28天各處死6只，分別為E7、E 14、E28組。各組及各時間點的動物處死前均先行肺功能檢查。各組大鼠行心臟放血處死，取右肺組織，用多聚甲醛溶液固定、常規(guī)石蠟包埋、切片，分別應(yīng)用HE染色和Masson染色，觀察肺泡炎和肺纖維化的動態(tài)變化，并進(jìn)行Szapiel病理分級：左肺組織勻漿后用于檢測羥脯氨酸(HYP)含量、丙二醛(MDA)含量、髓過氧化物酶(MPO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。 結(jié)

6、果：1 肺功能指標(biāo)變化1.1 肺活量變化(cmH2o)：A組肺活量為(12.23±0.2)。B組3個時間點分別為(6.33±0.13)、(6.13±0.16)、(5.96±0.33)，與A組比較顯著下降(P<0.01)。C7組肺活量為(7.06±0.12)，與A組比較顯著下降(P<0.01)，但高于B7組(P<0.05)；C14組和C28組肺活量分別為(8.04±0.19)和(8.58±0.26)，分別高于B14組和B28組，差異有顯著

7、性(P<0.05)，但低于A組，差異有顯著性(P<0.05)。 D7組為(8.72±0.21)，低于A組，但高于B7組和C7組，差異有顯著性(P<0.05)；D14組為(9.47±0.11)，低于A組，但高于B14組和C14組，差異有顯著性(P<0.05)；D28組為(9.67±0.17)，低于A組，但高于B28組和C28組，差異有顯著性(P<0.05)。E7組為(8.83±0.25)，低于A組，但高于B7組和C7組，差異有顯著

8、性(P<0.05)；高于D7組，但無顯著性差異(P>0.05)，E14組和E28組分別為(10.93±0.08)和(11.2±0.10)，高于相應(yīng)的B14組、C14組、D14組和B28組、C28組、D28組，有顯著性差異(P<0.05)，但均低于A組，差異有顯著性(P<0.05)。 1.2 肺順應(yīng)性指標(biāo)變化(ml/cmH2o)：各組大鼠肺順應(yīng)性于7天時無明顯改變，之后逐漸下降，28天時降到最低，A組肺順應(yīng)性為(0.221±0.016)。

9、B7組為(0.188±0.021)，低于A組(P<0.05)，B14和B28組分別為(0.108±0.022)和(0.098±0.024)，低于A組(P<0.0 1)。C7組為(0.207±0.015)，低于A組、高于B7組，但無顯著性差異(P>0.05)，C14組和C28組分別為(0.132±0.038)和(0.128±0.011)，高于相應(yīng)的B14組和B28組(P<0.05)，但低于A組，有顯著性差異(P<0.01)。D7組為(0.

10、210±0.018)，與A組、B7組、C7組相比均無顯著性差異(P>0.05)，D14組和D28組分別為(0.186±0.027)和(0.165±0.013)，高于相應(yīng)的B14組、C14組和D28組、C28組(P<0.05)，但低于A組(P<0.05)。E7組為(0.218±0.028)，與A組和各組7天時間點相比無顯著性差異(P>0.05)，E14組為(0.189±0.018)，低于A組、高于B14組、C14組，差異有顯著性(P<0.

11、05)，高于D14組，但差異無顯著性(P>0.05)，E28組為(0.1 86±0.009)，低于A組、高于B28組、C28組、D28組(P<0.05)。 2.肺組織勻漿中HYP含量(μg/mg prot)：A組為(2.18±0.21)。B7組含量為(2.32±0.38)，與A組相比無顯著性差異(P>0.05)，B14組和B28組分別為(6.96±0.22)和(8.36±0.27)，與A組相比顯著增高(P<0.01)。C7組為(

12、2.30±0.32)，與B7組和A組相比無顯著性差異(P>0.05)，C14組和C28組分別為(5.16±0.18)和(7.02±0.19)，與A組比較明顯升高(P<0.01)，分別與B14和B28組比較明顯下降(P<0.05)。 3.肺組織勻漿中SOD活力(U/mg prot)：B7組SOD活力為(44.34±5.07)與A組(78.83±4.77)比較有顯著降低(P<0.01)，之后有所回升，B14組為(58.62±3.98

13、)，仍顯著低于A組(P<0.01)，B28組為(72.44±5.16)，與A組無顯著差異性(P>0.05)。C7組為(55.12±3.42)，較B7組明顯升高(P<0.05)，但仍較A組明顯降低(P<0.01)，C14組為(66.33±4.15)，較B14組有所升高，但兩組差異無顯著性(P>0.05)，較A組顯著下降(P<0.05)，C28組仍維持較高水平，為(71.18±5.21)，與B28組和A組比較均無顯著差異(P>0.05)。

14、 4 肺組織勻漿中MDA含量(nmol/mg prot)：A組MDA含量為(1.02±0.16)。B7組為(2.1±0.18)，B14組為(1.32±0.19)，都較A組明顯升高(P<0.05)，B28組為(1.24±0.28)，較A組升高，但差異無顯著性(P>0.05)。C7組為(1.34±0.11)，較A組明顯升高(P<0.05)，較B7組明顯下降(P<0.05)，C14組為(1.24±0.25)，較A組升高，較B14組下降

15、，但差異均無顯著性(P>0.05)，C28組為(1.22±0.29)，也較A組升高，較B28組下降，但差異均無顯著性(P>0.05)。 5 肺組織勻漿中MPO含量(u/g prot)：A組MPO含量為(5.67±0.26)。B7組(12.63±0.22)、B14組(10.10±0.21)都較A組明顯升高(P<0.01)，B28組為(7.16±0.28)，也較A組明顯升高(P<0.05)。C組中C7組為(8.25±0.19)，

16、較A組明顯升高(P<0.01)，較B7組明顯下降(P<0.05)，C14組為(6.87±0.18)，較A組升高(P<0.05)，較B14組下降(P<0.05)，C28組為(6.29±0.29)，雖較A組升高，較B28組下降，但差異均無顯著性(P>0.05)。D組中D7組為(7.42±0.23)，較A組明顯升高(P<0.05)，較B7組明顯下降(P<0.05)，較C7組下降，但差異無顯著性(P>0.05)，D14組為(6.9±0.20)，

17、較A組升高(P<0.05)，較B14組下降(P<0.05)，較C14組上升，但差異無顯著性(P>0.05)，D28組為(6.35±0.42)，較A組、C28組升高，較B28組下降，但差異均無顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：1 體內(nèi)氧化一抗氧化失衡在肺纖維化形成過程中發(fā)揮重要作用。2 氨基胍、厄多司坦對博萊霉素致大鼠肺纖維化有治療作用，而且其療效優(yōu)于傳統(tǒng)的激素(地塞米松)療法，并且氨基胍和厄多司坦對肺纖維化的治療起協(xié)同作用。3 氨