蛇床子素對博萊霉素致肺纖維化動物的干預作用及其機制研究.pdf

1、目的:
　　 觀察蛇床子素(Osthole,Ost)對博萊霉素(BLM)致肺纖維化動物模型的干預作用,并探討其抗肺纖維化作用機制。
　　 方法:
　　 昆明小鼠及SD大鼠分別隨機分為正常對照組、模型組、醋酸潑尼松組與蛇床子素大、中、小劑量組。通過氣管內一次性滴注博萊霉素小鼠(5mg／kg)、大鼠(4.5mg／kg)復制肺纖維化動物模型。造模第2d起,各治療組給予相應劑量藥物灌服治療,正常對照組及模型組給予1ml／

2、100g的5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)。各實驗組動物于給藥后28d處死,取肺組織稱取肺濕重,計算肺系數:肺濕重(mg)／體重(g)；取部分肺組織進行HE染色及透射電鏡觀察,觀察其病理形態(tài),并參照Szaopiel等方法對肺泡炎和肺纖維化程度進行評分；測定肺組織及血清中羥脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、總抗氧化能力(TotalAntioxidant Capacity,T

3、-AOC)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、一氧化氮合酶(Nitricoxide Synthase,NOS)、抑制羥自由基(Hydroxy radical,·OH)能力的水平；應用免疫組織化學技術,檢測轉化生長因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF—β1)、Ⅲ型膠原蛋白(CollagenⅢ,Col-Ⅲ)、α-平滑肌動蛋白(α-Smooth muscleactin,α-SMA)在肺組織中的表

4、達；半定量RT-PCR檢測TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4mRNA的表達；免疫印跡法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscleactin,α-SMA)、小窩蛋白-1(Caveolin,Cav-1)、骨橋蛋(Osteopontin,OPN)的表達。
　　 結果:
　　 (1)蛇床子素可不同程度地抵抗BLM所致小鼠、大鼠的體重減輕并降低肺系數。
　　 (2)蛇床子素可顯著降低肺纖維化大、小

5、鼠肺組織HYP的含量(P<0.001)。
　　 (3)肺組織及血清生化指標測定結果顯示,蛇床子素可顯著降低MDA的含量和NOS的活力(P<0.05,P<0.01),提高T-AOC和抑制·OH能力、升高GSH的含量(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。
　　 (4)光鏡和電鏡觀察結果顯示,給予蛇床子素干預的小鼠、大鼠的肺泡炎程度、肺纖維化程度和超微結構改變明顯減輕(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。<

6、br>　　 (5)免疫組織化學結果顯示,蛇床子素能顯著抑制肺纖維化小鼠肺組織中TGF-β1、α-SMA和ColⅢ蛋白的表達(P<0.01,P<0.001)。
　　 (6)肺組織RT-PCR結果顯示蛇床子素可顯著下調肺纖維化大鼠肺組織中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4mRNA的表達(P<0.05,P<0.01)。
　　 (7)肺組織Western-blot結果顯示蛇床子素可顯著提高肺纖維化大鼠肺組織中Ca