MicroRNAs在慢性淋巴增殖性疾病中的表達(dá)及其在慢性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后中的意義研究.pdf

1、博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：b2007392MicroRNAs在慢性淋巴增殖性疾病中的表達(dá)及其在慢性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后中的意義研究所院：姓名：指導(dǎo)教師：導(dǎo)師小組：學(xué)科專業(yè)：研究方向：完成日期：血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院周可樹(shù)邱錄貴教授邱錄貴齊軍元鄒德慧內(nèi)科學(xué)慢性淋巴增殖性疾病二零一零年五月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文Micr0RN缸在慢性淋巴增殖性疾病中的表達(dá)及其在慢性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后中的意義研究摘要背景與目的：最近

2、幾年，一類新的小分子RNA，micfo對(duì)悄(亦稱m諏)，引起了科學(xué)研究者的極大關(guān)注。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，micr0對(duì)叮As的異常表達(dá)在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)病中起到重要作用，其在慢性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)病及預(yù)后中的作用尤其受到重視。在其他惡性淋巴增殖性疾病中，micr0RNAs與疾病的關(guān)系也得到了初步的研究。有作者報(bào)道可以根據(jù)Inicr0RNA表達(dá)譜的不同，對(duì)疾病進(jìn)行鑒別診斷。本研究旨在通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)mil029c、miR150、

3、miR223、nliR155及miR_146a在我國(guó)慢性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤及脾邊緣區(qū)淋巴瘤患者CDl9B淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況，并與正常人進(jìn)行比較，觀察不同疾病之間及不同疾病與正常人之間有無(wú)差異；同時(shí)對(duì)這5個(gè)micr0對(duì)忱在慢性淋巴細(xì)胞白血病中是否具有預(yù)后意義進(jìn)行分析。方法：慢性淋巴細(xì)胞白血病53例，套細(xì)胞淋巴瘤(Ⅳ期患者)13例，脾邊緣區(qū)淋巴瘤(Ⅳ期患者)9例，正常人標(biāo)本12例。標(biāo)本主要為外周血(78例)，少部分為骨髓(9例)

4、。常規(guī)分離單個(gè)核細(xì)胞，并行CDl9磁珠分選。應(yīng)用mirVanaⅢ刪AIsol撕0nKjt提取CDl9細(xì)胞的總對(duì)忱，然后應(yīng)用嘲m弧micr0砒蛆I汀Kjt及nliR29c、砌0150、mil0223、I衄0155、miR146a及內(nèi)對(duì)照I心m48逆轉(zhuǎn)錄引物將每例標(biāo)本的融蛆(每個(gè)m：淑應(yīng)用10ng)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用TaqMaIl探針?lè)ㄟM(jìn)行每例標(biāo)本5個(gè)micr0對(duì)蛆及內(nèi)對(duì)照的相對(duì)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。校正器選用N鋤alwa細(xì)胞系，PCR結(jié)

5、果采用2?！鳌鱍法進(jìn)行分析。應(yīng)用SPSSl6O軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。慢性淋巴細(xì)胞白血病疾病不同分期間及各不同診斷之間窳cr0鼢蛆s平均水平的比較應(yīng)用單因素方差分析，并進(jìn)一步用最小顯著差法進(jìn)行兩兩比較；慢性淋巴細(xì)胞白血病各不同預(yù)后分組間血cr0舭平均水平的比較，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。在慢性淋巴細(xì)胞白血病患者，采用I的C曲線方法，根據(jù)IgvH的突變狀態(tài)尋找IIlicr0RNAs的適宜切點(diǎn)，應(yīng)用勛planMeier方法繪制生存曲線，組間的中位生