性激素對人正常早孕及自然流產(chǎn)子宮蛻膜局部免疫的作用.pdf

1、[目的]
　　 通過觀察正常早孕與自然流產(chǎn)患者子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞在性激素作用下白細(xì)胞介素-18(interleukin-18，IL-18)的表達(dá)，以及子宮自然殺傷細(xì)胞(uterine naturalkiller cells，uNK cells)在孕激素作用下細(xì)胞亞群的變化，探討IL-18、uNK細(xì)胞與自然流產(chǎn)三者之間的關(guān)系。
　　 [方法]
　　 1.將13例正常早孕患者(Normal early pregnanc

2、y group，N組)及15例自然流產(chǎn)患者(Spontaneous abortion group，S組)子宮蛻膜細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)后，按以下方式將兩組分別分為10組進(jìn)行處理，即對照組(Control group，C組)、HCG(人絨毛膜促性腺激素)組(濃度分別為10、100、1000mIU/ml，對應(yīng)為H1、H2、H3組)，Estradiol(17β-雌二醇)組(濃度分別為10-7、10-8、10-9mol/L，對應(yīng)為E1、E2、E3組)

3、，Progesterone(孕酮)組(濃度分別為10-6、10-7、10-8mol/L，對應(yīng)為P1、P2、P3組)。
　　 2.免疫組化分析正常早孕及自然流產(chǎn)患者子宮蛻膜組織形態(tài)及IL-18表達(dá)變化。
　　 3.各組分別在藥物作用24、48、72h后，采用MTT方法檢測細(xì)胞增殖情況；用ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液IL-18含量。
　　 4.孕激素作用下子宮蛻膜細(xì)胞與子宮蛻膜單核細(xì)胞共培養(yǎng)，免疫組化分析孕激素作

4、用后子宮蛻膜細(xì)胞上IL-18的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測子宮自然殺傷細(xì)胞亞群比率的變化。
　　 [結(jié)果]
　　 1.藥物作用對蛻膜基質(zhì)細(xì)胞增殖能力的影響藥物作用24h后H2組、P1組、P2組蛻膜基質(zhì)細(xì)胞增殖能力較對照組降低(p<0.05)，但隨著培養(yǎng)時間延長，各劑量組HCG、Estradiol、Progesterone刺激對其增殖能力均無顯著影響(p>0.05)。
　　 2.藥物作用對細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-18含量的影

5、響對照組蛻膜基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)48h及72h，自然流產(chǎn)組的IL-18含量較正常早孕組顯著增高(p<0.05)。
　　 2.1正常早孕組組內(nèi)比較2.1.1 HCG組：
　　 藥物作用24h后，各劑量組IL-18含量低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 藥物作用48h后，H1組IL-18含量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。H2、H3組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　

6、 藥物作用72h后，H1、H2、H3組IL-18含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.1.2 Estradiol組：
　　 藥物作用24h后，E1、E2、E3組IL-18含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 藥物作用48h后，E1組IL-18含量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。E2、E3組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　

7、藥物作用72h后，E1、E2、E3組IL-18含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.1.3 Progesterone組：
　　 藥物作用24h、48h、72h后，P1、P2、P3組IL-18含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.2自然流產(chǎn)組組內(nèi)比較2.2.1 HCG組：
　　 藥物作用24h后，H3組IL-18含量高于對照孔，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.0

8、5)。H1、H2組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 藥物作用48h后，H1、H2、H3組IL-18含量均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 藥物作用72h后，H3組IL-18含量低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。H1、H2組IL-18含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.2.2 Estradiol組：
　　 藥物作用24h、48h

9、后，E1、E2、E3組IL-18含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 藥物作用72h后，E1、E2組IL-18含量均較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 2.2.3 Progesterone組：
　　 藥物作用24h、48h后，P1、P2、P3組IL-18含量與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 藥物作用72h后，P1、P2、P3組IL-18含量均

10、較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 2.3正常早孕組與自然流產(chǎn)組組間比較：
　　 2.3.1 HCG組：
　　 藥物作用24h后，自然流產(chǎn)組H1、H2、H3組IL-18含量均高于正常早孕組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 藥物作用48h后，自然流產(chǎn)組H1、H2組IL-18含量低于正常早孕組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。自然流產(chǎn)組H3組與正常早孕組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p

11、>0.05)。
　　 藥物作用72h后，H3組IL-18含量高于正常早孕組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 自然流產(chǎn)組H1、H2組與正常早孕組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.3.2 Estradiol組：
　　 藥物作用24h、72h后，自然流產(chǎn)組E1、E2、E3組IL-18含量與正常早孕組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 藥物作用48h后，自然流產(chǎn)組E3組

12、IL-18含量高于正常早孕組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。自然流產(chǎn)組E1、E2組與正常早孕組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.3.3 Progesterone組：
　　 藥物作用24h、48h、72h后，自然流產(chǎn)組P1、P2、P3組IL-18含量與正常早孕組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.4藥物作用72h后，P1、P2、P3、E1、E2組各組之間IL-18含量差別無統(tǒng)計學(xué)意

13、義(p>0.05)。
　　 3.免疫組化實驗結(jié)果：正常早孕組和自然流產(chǎn)組患者蛻膜組織均有IL-18表達(dá)，兩組表達(dá)強(qiáng)度無顯著差異。
　　 自然流產(chǎn)組在蛻膜間質(zhì)細(xì)胞胞漿IL-18的表達(dá)較正常早孕組明顯，但二者表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 自然流產(chǎn)組在蛻膜腺體細(xì)胞胞漿IL-18的表達(dá)與正常早孕組比較，二者表達(dá)強(qiáng)度無顯著差異。
　　 4.孕激素作用后細(xì)胞免疫組化實驗結(jié)果：
　　 正常早孕組和孕激素作用前后

14、的自然流產(chǎn)組蛻膜基質(zhì)細(xì)胞胞漿均有IL-18表達(dá)。對照組IL-18表達(dá)以中度陽性(++)為主，實驗組以強(qiáng)陽性(+++)為主，藥物組以中度-強(qiáng)陽性(++～+++)為主，3組間兩兩比較均有顯著差異(p<0.05)。
　　 5.子宮自然殺傷細(xì)胞流式細(xì)胞檢測實驗結(jié)果：
　　 CD56+CD16-NK細(xì)胞數(shù)量：正常早孕蛻膜NK細(xì)胞>孕激素作用后自然流產(chǎn)蛻膜NK細(xì)胞>自然流產(chǎn)蛻膜NK細(xì)胞(兩兩比較均有差異，p>0.05)；
　　

15、 各組間CD56+CD16+、CD56-CD16+NK細(xì)胞兩兩比較無差異。
　　 [結(jié)論]
　　 從實驗結(jié)果來看，子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)時具有良好的生物活性。HCG、E2、P4作用對子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖能力并無改變。適當(dāng)?shù)募に刈饔媚芙档腕w外培養(yǎng)自然流產(chǎn)患者子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞上清液中IL-18的分泌并至正常早孕水平。孕激素能顯著減少體外培養(yǎng)自然流產(chǎn)患者子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞IL-18的表達(dá)，但其表達(dá)水平仍明顯高于正常早孕患者