轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在正常月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜及早孕蛻膜中的表達(dá)，及其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、蛻膜化是子宮內(nèi)膜轉(zhuǎn)化為蛻膜的過程，是囊胚著床和維持妊娠所必需的。著床到月經(jīng)發(fā)生的這一段時(shí)間(即LH峰后的7-14天)子宮內(nèi)膜將作出決定：是繼續(xù)蛻膜化還是剝脫、月經(jīng)來潮。大約有50％的妊娠流產(chǎn)發(fā)生在這個(gè)時(shí)期，但是關(guān)于蛻膜化過程中的分子信號(hào)還不完全清楚。因此探討蛻膜化的機(jī)制將有助于了解正常的著床過程，同時(shí)對(duì)臨床上部分不孕病人及IVF中著床失敗的病人也有幫助。 FoxO1在蛻膜化過程中發(fā)揮重要作用。Buzzio等發(fā)現(xiàn)：FoxO1調(diào)節(jié)

2、許多與蛻膜化相關(guān)基因的表達(dá)，如：IGFBP1、PRL、DCN、TIMP3和CNR1，同時(shí)轉(zhuǎn)染FoxO1基因也能引起子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞發(fā)生蛻膜細(xì)胞樣的形態(tài)學(xué)變化，F(xiàn)oxO1上調(diào)泌乳素(prolactin，PRL)基因啟動(dòng)子的活性，下調(diào)TIMP3基因啟動(dòng)子的活性。 目前尚未發(fā)現(xiàn)有系統(tǒng)研究FoxO1蛋白在人月經(jīng)周期各個(gè)時(shí)期的表達(dá)量及細(xì)胞定位，以及FoxO1在人妊娠早期的表達(dá)情況的報(bào)道，因此我們使用RT-Q-PCR、免疫組化和weste

3、rn blot檢測(cè)FoxO1轉(zhuǎn)錄因子在人正常月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜和早孕蛻膜中的表達(dá)。同時(shí)目前關(guān)于子宮內(nèi)膜中調(diào)節(jié)FoxO1表達(dá)的因子研究得還比較少，因此我們研究了與體外蛻膜化有關(guān)的因子：cAMP、P、E和hCG與FoxO1表達(dá)的關(guān)系，以發(fā)現(xiàn)與FoxO1在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)有關(guān)的調(diào)節(jié)因素，并初步探討了其信號(hào)傳遞途徑。 全文分為三部分： 第一部分 轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在人正常月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜及早孕蛻膜中的表達(dá) 目的：

4、系統(tǒng)研究FoxO1在月經(jīng)周期各個(gè)時(shí)期子宮內(nèi)膜及早孕蛻膜中表達(dá)的規(guī)律及細(xì)胞定位。 方法：采用RT-Q-PCR、免疫組化及western blot檢測(cè)了因子宮肌瘤或?qū)m頸上皮內(nèi)瘤樣病變而行子宮切除術(shù)的生育期婦女的子宮內(nèi)膜組織39例(增殖期12例，分泌早期7例，分泌中期10例，分泌晚期10例)及12例蛻膜組織(來源于孕早期行人工流產(chǎn)的生育期婦女)中FoxO1的表達(dá)。 結(jié)果： 1、免疫組化發(fā)現(xiàn)：增生期FoxO1在上皮

5、細(xì)胞中顯胞漿弱陽(yáng)性表達(dá)，間質(zhì)細(xì)胞顯陰性；分泌期早期FoxO1在上皮細(xì)胞的胞漿和核均陽(yáng)性表達(dá)，分泌期中、晚期FoxO1在上皮細(xì)胞的胞漿和核均強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；分泌早、中期FoxO1在間質(zhì)細(xì)胞的胞漿顯陽(yáng)性表達(dá)；分泌晚期間質(zhì)細(xì)胞以核強(qiáng)陽(yáng)性為主，在細(xì)胞漿中也有表達(dá)；在早孕蛻膜上皮細(xì)胞中胞漿和核均強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，間質(zhì)細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。 2、RT-Q-PCR和western blot顯示：各時(shí)相FoxO1的表達(dá)量，以早孕期表達(dá)量最高，分泌期較增生期增

6、強(qiáng)，分泌中期和晚期的表達(dá)量與分泌早期相比顯著增強(qiáng)，分泌中期與分泌晚期的表達(dá)量無差異。 結(jié)論：FoxO1在子宮內(nèi)膜的表達(dá)隨月經(jīng)周期動(dòng)態(tài)變化，分泌中、晚期達(dá)高峰，在妊娠早期蛻膜中的表達(dá)進(jìn)一步升高。 第二部分 FoxO1調(diào)節(jié)因素的研究及其在蛻膜化過程中的表達(dá)情況 目的：研究cAMP、黃體酮、雌二醇和hCG與FoxO1表達(dá)的關(guān)系，以發(fā)現(xiàn)與FoxO1在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)有關(guān)的調(diào)節(jié)因素。探討FoxO1在體外蛻膜化過程

7、中的表達(dá)情況。 方法：采用RT-Q-PCR、細(xì)胞免疫組化和western blot檢測(cè)cAMP、P、E和hCG對(duì)體外培養(yǎng)的人增生期子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中FoxO1表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，以及在體外蛻膜化過程中FoxO1的表達(dá)情況。 結(jié)果：與對(duì)照組比較，黃體酮組、黃體酮+雌二醇組、hCG組子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中FoxO1 mRNA的表達(dá)無差異(P>0．05)。使用western blot，對(duì)照組、黃體酮組、黃體酮+雌二醇組、hCG組均

8、未檢測(cè)到FoxO1的表達(dá)。與對(duì)照組比較，cAMP組、cAMP+黃體酮組中FoxO1 mRNA和蛋白的表達(dá)明顯增加(P<0．05)；與cAMP組比較，cAMP+黃體酮組中FoxO1 mRNA和蛋白的表達(dá)也是增加的(P<0．05)。cAMP組中FoxO1在基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá)，cAMP+黃體酮組中FoxO1在基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞漿中表達(dá)。在cAMP導(dǎo)致的蛻膜化過程中，也伴隨FoxO1在基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)論：黃體酮、黃體酮+雌二醇、

9、hCG對(duì)體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中Fox01的表達(dá)沒有影響。FoxO1的表達(dá)受cAMP的調(diào)節(jié)；在cAMP存在的情況下，黃體酮對(duì)FoxO1．的表達(dá)具有協(xié)同作用。蛻膜化過程中，也伴隨有FoxO1在基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)。 第三部分 cAMP-PKA信號(hào)途徑與FoxO1基因的表達(dá) 目的：研究cAMP-PKA信號(hào)途徑是否參與了FoxO1基因的表達(dá)。 方法：使用PKA抑制劑H89，研究阻斷cAMP-PKA信號(hào)途徑后對(duì)cA