中藥水蛭對糖尿病大鼠早期腎臟病變干預作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)是我國終末期腎病(End stage renaldisease,ESRD)的主要病因之一,因此探究DN的發(fā)病機制及防治具有重要意義。本實驗通過觀察水蛭(Leech)對DN大鼠腎臟指數(shù)(KI)、血糖(BG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(Bun)、尿微量白蛋白(Alb)的影響；HE染色觀察腎臟結(jié)構(gòu),免疫組化觀測腎臟MMP-9、TIMP-1、TGF-β1的表達；

2、ELISA檢測血清TGF-β1、Ⅳ型膠原蛋白表達；電鏡下觀察腎小球濾過膜、腎小管線粒體；來探討水蛭對糖尿病腎病(DN)大鼠腎臟早期病變的防治作用及可能機理。
　　 方法：
　　 清潔級SD大鼠45只隨機分組。10只為A(正常)組給予檸檬酸緩沖液腹腔注射,余大鼠給給予鏈脲佐菌素(STZ)55mg/kg腹腔注射制備DN大鼠模型。2天后測血糖大于16.7mmol/l,為造模成功。共造模35只,其中1只死亡,4只未成模。30只隨

3、機分為B(糖尿病模型)組、C(水蛭)組、D(替米沙坦)組。適應性喂養(yǎng)一周后,C組予水蛭粉混懸液按1g/kg/d灌胃,D組予替米沙坦混懸液按30mg/kg/d灌胃,A、B組給予等量蒸餾水灌胃,所有組別自由進水進食。所有組別灌胃8周后處死。
　　 結(jié)果：
　　 ①腎重指數(shù)及一般生化指標:與A組比較,B、C、D組KI比值增高(P<0.01),BG、Cr、Bun、Alb明顯升高(P<0.01)；與B組比較,C組、D組KI比值降低

4、(P<0.01),BG無明顯變化,Cr、Bun、Alb明顯降低(P<0.01)。②光鏡觀察顯示:B組系膜增生、腎小管內(nèi)水腫,C、D組病變較輕；電鏡顯示:B組足突細胞融合、基底膜增厚、內(nèi)皮細胞排列不規(guī)則、腎小管線粒體嵴消失,C、D組病變較輕。③免疫組化指標:與A組比較,B、C、D組MMP-9的表達減少(P<0.01),TGF-β1,TIMP-1的表達增多(P<0.01)；與B組比較,C組、D組MMP-9的表達增多(P<0.01),TGF-

5、β1,TIMP-1的表達減少(P<0.01)。④ELISA指標:與A組比較,B、C、D組血清TGF-β1、Ⅳ-C的表達增多(P<0.01),與B組比較,C組、D組血清TGF-β1、Ⅳ-C的表達減少(P<0.01)。⑤相關(guān)性分析:TGF-β1與MMP-9呈負相關(guān)r=-0.750(P<0.01)；TGF-β1與TIMP-1呈正相關(guān)r=0.891(P<0.01)MMP-9與TIMP-1呈負相關(guān)r=-0.820(P<0.01)；uAlb與血清T

6、GF-β1呈正相關(guān)r=0.882(P<0.01)；uAlb與血清Ⅳ-C呈正相關(guān)r=0.928(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 水蛭可減輕DN大鼠腎重比值,降低蛋白尿、肌酐、尿素氮,對DN大鼠血糖無明顯影響,說明水蛭減輕腎臟病變的作用與降低血糖無關(guān)；水蛭減輕可DN腎臟系膜增生及腎小球濾過膜的改變；水蛭減輕腎臟病變的機理可能與降低DN腎臟TGF-β1、TIMP-1的表達,增加MMP-9的表達；降低血清TGF-β1、Ⅳ-