ILK在2型糖尿病大鼠腎臟的表達及辛伐他汀的干預作用.pdf

1、目的：隨著生活水平的提高，糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）的患病率呈逐年上升趨勢，糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥，是1型糖尿病病人死亡的主要原因，在包括美國、澳大利亞、歐洲的一些地區(qū)以及新加坡等在內的許多國家中，DN是引起終末期腎?。╡nd stage renal disease，ESRD）的第一位原因。整合素連接激酶（integrin－linked kina

2、se，ILK）在腎臟中高表達，可能在糖尿病腎損害中發(fā)揮作用。他汀類藥物不僅有調脂的腎臟保護作用，而且還有抗炎癥、免疫調節(jié)等非依賴調脂的腎臟保護作用。本研究通過高糖高脂膳食飼養(yǎng)Sprague-Dawlay（SD）大鼠，再注射小劑量鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ），誘發(fā)胰島素抵抗和高血糖，從而復制2型糖尿?。═ype2 diabetes mellitus，T2DM）大鼠模型，觀察糖尿病大鼠腎臟ILK表達水平、形態(tài)學改變及辛

3、伐他汀治療的影響，探討ILK在2型糖尿病腎臟病變中的作用和辛伐他汀腎臟保護作用及機制。
　　 方法：從50只SD大鼠中隨機抽取10只作為正常對照組（A組），其余作為實驗組。對照組喂以普通飼料，實驗組喂以高糖高脂飼料（普通飼料中加入20％蔗糖、2.5％膽固醇、15％熟豬油）。4周后實驗組大鼠出現胰島素抵抗（insulin resistance，IR），再給予STZ30 mg/kg腹腔注射。于實驗第6周末選取空腹血糖（fasting

4、 blood glucose，FBG）>7.8 mmol/L且伴有胰島素敏感性降低者作為T2DM大鼠模型，并隨機分為2組，即T2DM模型組（B組）、T2DM辛伐他汀治療組（C組）。實驗持續(xù)時間共14周。于第14周末心臟取血測定FBG、空腹胰島素（fasting insulin，FINS）、胰島素敏感指數（insulin sensitivity index，ISI）、血肌酐（serum creatinine，Scr）與三酰甘油（trigl

5、yceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low densitv lipoprotein cholesterol，LDL-C）以及極低密度脂蛋白膽固醇（very low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平。第14周末實驗結束前，代

6、謝籠收集24小時尿液，測定尿白蛋白與尿肌酐（urine creatinine，Ucr），并計算內生肌酐清除率（creatinine clearance rate，Ccr）。取大鼠腎皮質行光鏡（HE染色、PAS染色、Masson染色）及電鏡觀察。免疫組化檢測ILK在腎皮質中的表達，應用計算機圖像分析系統計算腎皮質中ILK的積分光密度（integral optical density，IOD）值，應用醫(yī)學圖像分析系統計算腎臟纖維化百分率。使

7、用SPSS13.0統計軟件處理實驗數據，兩組比較采用t/t’檢驗，組間比較采用方差分析，相關分析采用直線相關分析。
　　 結果：
　　 1、實驗第6周末各項檢測指標：注射STZ2周后，實驗組大鼠FBG（12.87±1.00）mmol/L高于正常對照組5.06±0.70mmol/L，FINS18.79（18.23，19.29）mlU/L與對照組18.35（17.95，18.98）mIU/L比較無統計學差異（P>0.05），

8、ISI0.0048（0.0045，0.0053）低于正常對照組0.0106（0.0103，0.0112）（均P<0.01），至此T2DM模型復制成功。
　　 2、實驗14周末生化指標：A組大鼠FBG（4.96±0.92）mmol/L、TG（0.67±0.21）mmol/L、TC（2.23±0.43）mmol/L、LDL-C（1.23±0.12）mmol/L、VLDL-C（0.36±0.08）mmol/L、HDL-C（0.89±0

9、.06）mmol/L，B組大鼠FBG（13.154±1.18）mmol/L、TG（1.89±0.20）mmol/L、TC（3.23±0.28）mmol/L、LDL-C（2.32±0.12）mmol/L、VLDL-C（0.85±0.11）mmol/L均高于A組（p<0.01），HDL-C（0.37±0.08）mmol/L低于A組（p<0.01），C組大鼠FBG（12.70±1.05）mmol/L與B組無統計學差異（P>0.05），TG（1

10、.33±0.26）mmol/L、TC（2.44±0.35）mmol/L、LDL-C（1.55±0.11）mmol/L、VLDL-C（0.57±0.10）mmol/L均低于B組（p<0.01），HDL-C（0.56±0.10）mmol/L高于B組（p<0.01）。
　　 3、腎重指數：與A組（3.594±0.29）比較，B組腎重指數（8.96±1.08）明顯增加（P<0.01），提示腎臟肥大；與B組比較，C組腎重指數（7.01±0

11、.97）減?。≒<0.01），但仍高于A組（P<0.01）。
　　 4、尿白蛋白：與A組（0.03+0.21mg/24h）比較，B組尿白蛋白（1.37±0.05mg/24h）明顯增加（p<0.01）；與B組比較，C組尿白蛋白（0.66±0.02mg/24h）明顯減少，但仍高于A組（p<0.01）。
　　 5、腎功能：①BUN：B組（8.22±1.36）mmol/L和C組（7.75±1.52）mmol/L與A組（6.99±

12、1.45）mmol/L比較，BUN水平變化無統計學差異（p>0.05）。②Scr：B組（62.59±10.45）μmol/L和C組（60.88±10.10）μmol/L與A組（60.50±6.02）μmol/L比較，Scr水平變化無統計學差異（p>0.05）。③Ccr：B組Ccr（1.32±0.36 ml/min）明顯高于A組（0.12±0.06 ml/min）（p<0.01）；C組Ccr（0.47±0.35ml/min）低于B組，但仍

13、高于A組（p<0.01）。
　　 6、組織形態(tài)學改變：光鏡顯示，HE染色：A組腎小球形態(tài)規(guī)則，腎小球內細胞排列規(guī)則，腎小球毛細血管網基底膜清晰規(guī)整，包曼氏囊腔清晰可見；B組腎小球體積明顯增大；C組腎小球體積有所減小，但與A組仍有差別。PAS染色：A組腎小球形態(tài)規(guī)則，有少量PAS陽性物質；B組PAS陽性物質增多，腎小球毛細血管網基底膜普遍增厚，個別視野可見腎小球滲出性病變，表現為囊滴；C組病變略有減輕，表現為腎小球輕度增大，腎小球

14、內細胞數目無明顯增多，腎小球毛細血管網基底膜輕微增厚。Masson染色：A組大鼠腎小球毛細血管網基底膜清晰規(guī)整，腎小球系膜區(qū)基質呈藍色；B組腎小球肥大，基底膜明顯增厚，系膜區(qū)基質明顯增多，膠原纖維增加；C組病變明顯減輕，系膜區(qū)基質較少，基底膜輕微增厚，膠原纖維較少。電鏡顯示，A組大鼠腎小球細胞基底膜均勻一致，足突排列整齊，內皮細胞形態(tài)正常；B組腎小球基底膜彌漫性增厚，呈丘狀隆起，相鄰足突大部分融合，內皮細胞胞質增多；C組腎小球基底膜彌漫

15、性增厚程度及系膜基質增多程度有所減輕，足突尚存，但與A組仍有差別。
　　 7、ILK蛋白表達水平：免疫組化圖像分析顯示，B組大鼠腎皮質ILK表達的IOD值（50.95±4.64）是A組（6.28±2.28）的8.1倍，C組（21.40±5.53）是B組的42％，差別具有統計學意義（均P<0.01）。Masson染色B組腎臟纖維化36％±3％，與ILK的IOD值呈正相關（r=0.672，p<0.01）。
　　 結論：