不同劑量甲潑尼龍對大鼠急性肺損傷治療效果及肺泡巨噬細胞在其中的作用.pdf

1、目的：觀察不同劑量甲潑尼龍(methylprednisolone，MPL)對大鼠急性肺損傷(acute lung injury，ALI)治療效果的差異，并探討不同劑量MPL對肺泡巨噬細胞(alveolar macrophages，AM)影響的不同在其中的作用。
　　方法：90只雄性成年清潔級大鼠隨機分為5組(n=18)：對照組(NS組)、損傷組(LPS組)、小劑量治療組(LPS+MPL3mg組)、中劑量治療組(LPS+MPL30m

2、g組)、大劑量治療組(LPS+MPL180mg組)。尾靜脈注射脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)5mg/kg/d(連續(xù)三天)制作急性肺損傷模型。首次尾靜脈注射LPS1h后，三個治療組分別連續(xù)腹腔注射MPL3mg/kg/d(LPS+MPL3mg組)、30mg/kg/d(LPS+MPL30mg組)或180mg/kg/d(LPS+MPL180mg組)；三天后，每天同一時間各治療組腹腔注射相應劑量MPL。LPS組尾靜脈注射

3、LPS1h后，連續(xù)腹腔注射生理鹽水(normal saline，NS)2ml/kg/d，三天后，每天同一時間相應劑量NS。對照組：尾靜脈、腹腔分別注射相應容量的NS。于制模后12h、7d和14d各組隨機處死6只大鼠并取材。
　　實驗期間每日觀察動物稱取體重，在規(guī)定時間處死動物后，結扎右側主支氣管，行左側支氣管肺泡灌洗，收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，取40μl灌洗液，20μl用

4、于計數(shù)BALF中細胞總數(shù)，20μl進行Wright-Giemsa染色觀察AM比例；余下BALF離心后取上清采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測Ⅲ型前膠原(procollagen typeⅢ，PCⅢ)含量；細胞沉淀進行AM提取，用吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色法檢測AM凋亡情況、髓過氧化物酶染色法檢測AM對凋亡中性粒細胞的吞噬活性。右肺中葉稱濕、干重，用于計算肺濕/干重比；下葉通過HE染色，觀察肺組織病理學改變。
　　結果：(1)腹腔注

5、射3mg和30mg MPL能有效抑制ALI大鼠體重下降趨勢并于造模9d后明顯高于LPS組(P<0.05)，而這兩組之間無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)；與以上兩組相比腹腔注射180mgMPL使ALI大鼠體重下降更明顯(P<0.05)，在造模8d后明顯低于其他各治療組及LPS組(P<0.05)，并呈不斷下降趨勢。(2)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減輕ALI大鼠右肺中葉濕/干重比(P<0.05)，到造模后14d時

6、與NS組已無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間在造模7d、14d時無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)；腹腔注射180mgMPL使肺濕/干重比在造模7d、14d時持續(xù)升高，并高于其他兩個治療組(P<0.05)，到造模后14d后時已明顯高于LPS組。(3)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減輕ALI大鼠右肺下葉病理學評分，到造模后14d時與NS組已無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間也無有統(tǒng)計

7、學意義的差異(P>0.05)；腹腔注射180mgMPL卻使ALI大鼠右肺下葉病理學評分在造模7d、14d時持續(xù)升高并高于其他兩個治療組(P<0.05)，到造模后14d時已明顯高于LPS組。(4)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減少ALI大鼠BALF中PCⅢ的含量，到造模后14d時與NS組已無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間沒有有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)；腹腔注射180mgMPL使ALI大鼠BA

8、LF中PCⅢ的含量在造模7d、14d時持續(xù)升高并高于其他兩個治療組(P<0.05)，到造模后14d時已明顯高于LPS組。(5)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL能有效減少ALI大鼠BALF中的細胞總數(shù)，到造模后14d時與NS組已無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)，且這兩組之間在造模7d、14d時無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)；腹腔注射MPL180mg使ALI大鼠7d、14d時持續(xù)升高并高于其他兩個治療組(P<0.05

9、)，到造模后14d時已明顯高于LPS組。(6)與LPS組相比，腹腔注射3mg和30mgMPL的ALI大鼠BALF中的AM比例在12h明顯下降(P<0.05)，但在造模7d及14d時逐漸回升，其中LPS+MPL3mg組到造模后14d時明顯高于其他兩個治療組并與NS組已無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)；腹腔注射MPL180mg使ALI大鼠BALF中的AM比例持續(xù)下降，并明顯低于其他各組(P<0.05)。(7)與LPS組相比，腹腔注射30

10、mg和MPL180mg能明顯促進大鼠AM凋亡(P<0.05)且明顯高于LPS+MPL3mg組及其他各組(P<0.05)，而LPS+MPL3mg組到造模14d時AM凋亡率與NS組已無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)。(8)與LPS組相比，腹腔注射180mg MPL能明顯降低ALI大鼠AM髓過氧化物酶染色陽性率(P<0.05)，并明顯低于其他兩個治療組(P<0.05)；LPS+MPL3mg組AM髓過氧化物酶染色陽性率降低明顯高于其他兩個治

11、療組(P<0.05)，且到造模后14d時AM凋亡率與NS組已無有統(tǒng)計學意義的差異(P>0.05)。
　　結論：1.從本研究檢測的指標看，腹腔注射3mg和30mg MPL能有效減輕ALI大鼠的肺部損傷并減少發(fā)生肺纖維化的可能，腹腔注射180mg MPL僅能在短期內減輕ALI大鼠的肺部損傷，到ALI中后期則會加重ALI大鼠的肺部損傷并增加發(fā)生肺纖維化的可能。2.相對于腹腔注射180mg MPL，3mg和30mg MPL促進AM的凋亡和