寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌對β--內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機制的研究.pdf

1、β-內(nèi)酰胺類抗生素是作用于金黃色葡萄球菌活性較好的一類廣譜、高效的抗生素，然而該類抗生素在臨床上的不合理應(yīng)用，導(dǎo)致其在臨床應(yīng)用中耐藥菌株的出現(xiàn)迅速增多，耐藥率也越來越高，并出現(xiàn)了大量的多藥耐藥菌株，從而對β-內(nèi)酰胺類抗生素用于臨床防治由金黃色葡萄球菌引起的感染性疾病產(chǎn)生了巨大的影響，因而研究寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥機制，不僅對臨床合理用藥具有指導(dǎo)意義，而且有利于降低和控制耐藥金黃色葡萄球菌的擴散。
　　

2、本研究主要采集寧夏部分地區(qū)奶牛場的臨床及亞臨床乳房炎樣品，采用革蘭氏染色鏡檢、金葡菌顯色培養(yǎng)基以及PCR擴增16S rDNA、nuc基因等方法進行金黃色葡萄球菌的分離鑒定。再依照CLSI標準委員會推薦的肉湯微量稀釋法測定14種抗菌藥物對分離株的MIC，并采用“青霉素邊緣實驗”進行β-內(nèi)酰胺酶的檢測。結(jié)果顯示，共鑒定出261株金黃色葡萄球菌，其對氨芐西林的耐藥率最高，達到79.74％，其次是青霉素(78.50％)、復(fù)方新諾明(67.43％

3、)、林可霉素(45.62％)、紅霉素(39.81％)、替米考星(37.53％);對氨基糖苷類、頭孢類及喹諾酮類藥物則比較敏感，敏感率都在60％以上。經(jīng)“青霉素邊緣實驗”表型確證實驗確定，261株牛源金黃色葡萄球菌中檢出147株產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株，產(chǎn)酶率為56.32％。
　　選取23株對青霉素高耐的菌株和10株敏感菌及1株金黃色葡萄球菌標準菌株ATCC25923采用HPLC技術(shù)進行細菌內(nèi)青霉素蓄積濃度的測定。結(jié)果顯示，菌內(nèi)青霉素蓄積

4、量在使用CCCP前后，10株敏感金黃色葡萄球菌及金黃色葡萄球菌標準株對青霉素的蓄積量并無太大變化，而有8株高耐藥菌株對青霉素的蓄積量受CCCP的影響較大。這說明主動外排機制是金黃色葡萄球菌的耐藥機制之一。
　　將23株對青霉素高耐的金黃色葡萄球菌在0μ g/ml和32μ g/ml青霉素濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，測定在兩種藥物濃度下，參與細菌細胞壁肽聚糖合成的重要蛋白青霉素結(jié)合蛋白PBP2以及GlmU、MurG功能酶的編碼基因pbpB、g

5、lmU、murG的表達水平。結(jié)果顯示，在32μ g/ml青霉素濃度下生長的細菌有5株耐藥菌的pbpB，glmU、murG的基因表達水平上調(diào)達到5倍左右，而內(nèi)參基因pta的基因表達水平無顯著變化。而在0μg/ml青霉素濃度下生長的細菌，這三組基因的表達水平均與內(nèi)參基因pta的表達水平相當，沒有顯著變化。說明細菌在含有抗生素不利的生長環(huán)境下通過自身細胞壁的增厚來提高對抗菌藥物的阻礙作用，以降低進入細胞的藥物含量，此研究初步揭示金黃色葡萄球菌