趨化因子CCL20與Th17細胞在IgA腎病發(fā)病機制中的相互作用.pdf

1、目的：檢測趨化因子CCL20在IgAN患者的表達水平，探討其受體CCR6在外周血免疫細胞的表達，并探究他們與Th17細胞在IgAN之間的相互作用，為IgAN的發(fā)病機制提供一條新思路。
　　方法：
　　1、用IgAN患者血清與人腎小球系膜細胞孵育24小時，運用RT-PCR技術篩選出高表達的趨化因子；運用Jacalin-Agrose親和層析法提取IgAN患者血清和健康人血清中的IgA1，然后分別與腎小球系膜細胞孵育24小時，再通

2、過RT-PCR檢測兩組CCL20的mRNA表達水平；再用ELISA的方法直接檢測IgAN及健康人兩組血清中CCL20的表達水平。
　　2、通過transwell趨化實驗及流式細胞分析了解CCL20優(yōu)先趨化的細胞及其受體在哪種（哪幾種）細胞上表達水平較高。
　　3、通過胞內(nèi)因子染色實驗及細胞因子表達譜實驗檢測CCR6+細胞與Th17細胞之間的關系。
　　4、應用免疫組化和免疫熒光技術分別檢測CCL20、T細胞及Th17細

3、胞三者在IgAN患者腎臟組織、其他腎病組織及癌旁組織的表達。
　　結果：
　　1、趨化因子CCL20在IgAN患者血清與HMC孵育后的表達上升；且無論是檢測兩組血清提取的IgA1與HMC孵育，還是單測IgAN患者和健康對照組的血清，結果均是CCL20的表達水平在IgAN患者組顯著高于健康對照組；
　　2、趨化因子CCL20優(yōu)先趨化外周血T細胞（成熟T細胞），并且其受體CCR6在成熟T細胞中表達水平及平均熒光強度都較高；

4、
　　3、CCR6+T細胞主要是分泌IL-17的Th17細胞，它們分泌炎癥因子到引起腎臟損傷或者形成免疫炎癥反應進一步損傷；
　　4、用免疫組化法檢測在IgAN患者組織檢測到CCL20，而對照組則否；用免疫熒光法檢測到CD3+CCR6+IL-17+細胞的存在，而對照組則否。
　　結論：在IgAN中CCL20的高表達引起CCR6+T細胞（主要是Th17細胞）的高表達，Th17細胞通過分泌大量的炎癥因子和細胞因子進一步引起