基因轉(zhuǎn)染對下頜骨牽引區(qū)細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響.pdf

1、牽引成骨技術(shù)(distraction osteogenesis,DO)作為活體骨組織工程的一種重要形式,為矯治各種先天及后天獲得性畸形或缺損提供了重要手段。但由于DO的療程相對較長,易引起較多并發(fā)癥和諸多社會心理問題,有待進(jìn)一步解決。同時,迄今為止,人們對牽引產(chǎn)生的機械張力如何轉(zhuǎn)化為生物學(xué)信號的細(xì)胞和分子機制尚不清楚。因此,如何促進(jìn)新骨生成,牽引過程中對細(xì)胞因子的調(diào)控成為目前的研究熱點。我們在前期研究中成功的建立了電穿孔介導(dǎo)的基因治療兔

2、下頜骨牽引成骨的動物模型,并證實了電穿孔技術(shù)介導(dǎo)的基因治療能促進(jìn)下頜骨DO過程中早期血管的生成,促進(jìn)新骨生成與鈣鹽沉積,增強新生骨的骨密度與骨強度。本研究在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探索電穿孔技術(shù)介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染后,下頜骨牽引區(qū)細(xì)胞因子表達(dá)的變化,以明確其促進(jìn)新骨生成的機制。
　　 目的:觀察電穿孔介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染后幾種關(guān)鍵的骨生長因子在牽引區(qū)局部的表達(dá)變化,探討基因治療促進(jìn)下頜骨牽引區(qū)新骨生成的機制,為臨床解決下頜骨牽引成骨的并發(fā)癥提供實驗

3、數(shù)據(jù)與理論依據(jù)。
　　 方法:選用新西蘭大白兔45只,沿雙側(cè)下頜骨邊緣切開皮膚,鈍性分離附著下頜骨的肌肉,暴露下頜骨。于下頜骨頦孔處,用微型電動鉆截開下頜骨,于下頜骨斷開處安放2cm牽引器、固定,逐層縫合組織。于術(shù)后3天開始牽引,每天0.8mm,連續(xù)牽引7天。將實驗動物分為5組:A組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg／μl)重組質(zhì)粒pIRES-hVEGF165-hBMP2；B組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg／μl)重組質(zhì)粒pIR

4、ES-hBMP2；C組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg／μl)重組質(zhì)粒pIRES-hVEGF165:D組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg／μl)空質(zhì)粒pIRES； E組:在牽引區(qū)注射相同劑量的生理鹽水。5組實驗動物均施加電穿孔刺激。各組分別于固定期第7、14、28天行空氣栓塞處死動物,切取牽引區(qū)新生骨組織,進(jìn)行組織學(xué)檢查,免疫組化染色檢測新生骨中的BMP、VEGF、FGF、TGF-β、CyclinsA、D1、E的表達(dá)情況。采用圖像分析系

5、統(tǒng)分析。
　　 結(jié)果:免疫組化染色顯示BMP、VEGF、FGF、TGF-β、CyclinsA、D1、E主要在肉芽組織中的炎細(xì)胞如單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及少量沿牽張方向排列的新生幼稚骨小梁表面的成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞和骨周圍結(jié)締組織中表達(dá)。這些生長因子均在固定7天時表達(dá)最強烈,14天時減弱,28天時部分生長因子僅微弱表達(dá)或陰性表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示基因治療組(A、B、C組)的生長因子表達(dá)在各時期均明顯高于對照組(D、E組)。