肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因轉(zhuǎn)染兔髁狀突軟骨細(xì)胞及轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)TMD的治療研究.pdf

1、目的 觀察攜帶有GFP標(biāo)記的HGFcDNA的質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染兔髁突軟骨細(xì)胞后的主要生物學(xué)特性,及其對(duì)TMD動(dòng)物模型的治療效果。方法 無(wú)菌條件下取兔髁狀突軟骨細(xì)胞體外進(jìn)行原代的培養(yǎng)與增殖,軟骨細(xì)胞傳至第Ⅱ代時(shí)以脂質(zhì)體為載體將GFP標(biāo)記的HGFcDNA轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,然后在倒置顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞增殖情況,瞬間細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率,噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的增生能力,免疫組化及原位雜交法測(cè)其Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染前后的變化與mRN

2、A的表達(dá)水平,HE細(xì)胞染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。通過(guò)綠色熒光光鏡下轉(zhuǎn)染細(xì)胞的瞬時(shí)計(jì)數(shù),在視野內(nèi)取100個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),共取10次,取其均值,得出轉(zhuǎn)染率結(jié)果。以膠原酶進(jìn)行顳下頜關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,建立TMD動(dòng)物模型,將收集的轉(zhuǎn)染后的軟細(xì)胞進(jìn)行關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,并與對(duì)照組(空白質(zhì)粒組)比較,通過(guò)組織切片觀察治療效果。結(jié)果 軟骨細(xì)胞的原代細(xì)胞在15%NBS的DMEM中24h后軟骨細(xì)胞開始舒展,第三天時(shí)基本完全貼壁,10d左右長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶底；原代軟骨細(xì)胞為

3、多邊形和三角形,細(xì)胞輪廓清晰,核仁明顯。第二代以脂質(zhì)體為載體的GFP標(biāo)記的HGFcDNA轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后在熒光顯微鏡下可清楚的看到GFP標(biāo)記的HGF進(jìn)入軟骨細(xì)胞內(nèi)；軟骨細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后2代左右變的細(xì)胞狹長(zhǎng)并逐漸變回原來(lái)的多變形、三角形,并可加速生長(zhǎng)和促進(jìn)其增殖,Ⅱ型膠原在第Ⅵ代時(shí)仍有較強(qiáng)表達(dá),軟骨細(xì)胞的“退化”現(xiàn)象明顯推遲,而對(duì)照組軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原則明顯減弱,細(xì)胞形態(tài)有較大的變異。通過(guò)綠色熒光光鏡下轉(zhuǎn)染細(xì)胞的瞬時(shí)計(jì)數(shù),基因轉(zhuǎn)染率大