可緩釋生物活性蛋白的無細胞組織工程真皮的構建研究.pdf

1、目前，組織工程真皮材料依其成分可分為含有細胞和不含細胞兩大類。前者如Dermagraff類，雖然它們在臨床試驗中都占有一席之地，但畢竟存在獲取較難、使用不便及潛在的抗原性等不利因素，而且值得注意的是，類似的這些組織工程皮膚產品雖然有些已在美國通過認證，如Transcyte等，但在歐洲尚沒有得到認可。如此，不含細胞類的真皮替代物又開始逐漸受到了重視，這其中又主要包括脫細胞真皮替代物(ADM)和無細胞真皮替代物兩大類，但在ADM中，如All

2、oderm也不能對抗原成分做到完全意義的去除，且來源有限、結構致密。考慮到人工材料具有可塑性、可控降解性等優(yōu)點，本課題的研究目標即為采用生物高分子材料構建一種無細胞成分的組織工程真皮支架，并在本實驗室研發(fā)的新型戰(zhàn)傷止血材料明膠-殼聚糖-PVA材料的工作基礎上，對其工藝進行進一步改進，再結合種子細胞的有效培養(yǎng)上清成份即活性蛋白，使其不但在真皮的缺損重建方面更具優(yōu)勢，而且以其經(jīng)濟可靠、攜帶和使用方便的特點為戰(zhàn)傷急救敷料的進一步研究應用打下了

3、較好的基礎。 目的：本研究制備的真皮缺損修復材料主要希望達到以下幾點：①有良好的生物相容性，可塑性強，可促進受損真皮組織創(chuàng)面的愈合；②緩釋系統(tǒng)釋放的生物活性蛋白對真皮重建有促進作用；③簡單易用，成本較低，可用于平戰(zhàn)時的皮膚創(chuàng)傷急救。 方法：首先確定以明膠、殼聚糖、PVA為主要原料混合冷凍干燥制備復合材料的方法，并進一步依據(jù)材料的綜合性能優(yōu)化原料配比工藝并觀察研究其用于皮膚創(chuàng)傷模型的修復效果。另外，在成纖維細胞(Fb)的培

4、養(yǎng)上清中分析出有效的生長因子類活性組分并確定其大量提取的工藝，最后結合明膠微球緩釋系統(tǒng)以期制備成具有促愈合作用的急救類真皮修復材料。 結果：明膠、殼聚糖和PVA以5％∶2％∶5％濃度用8∶4∶1的比例混合凍干制備的復合材料有較好的修復效果，且MTT實驗結果顯示材料無明顯細胞毒性，為最終確定的真皮支架材料的制備方法；采用超濾離心法成功的提取了成纖維細胞培養(yǎng)上清中的有效活性蛋白，各種檢測結果表明，上清液中大于10KD的因子組合比較適

5、于真皮Fb的生長，尤其是10～30KD組對其促增殖的表現(xiàn)更有優(yōu)勢；而5～30KD的因子組合更適于對表皮細胞的生長，尤其5～10KD組對其單純的增殖有著明顯的促進作用；采用改良的乳化冷凝法制備了明膠微球(GMS)緩釋系統(tǒng)，對其一般性質進行了觀測，并發(fā)現(xiàn)其復合一定濃度的上清因子對Fb有較好的持續(xù)促增殖的作用；在復合活性蛋白的支架材料對豬皮膚全層缺損修復作用的研究中，無論從大體觀察還是組織學觀察，實驗組不但較空白對照組愈合效果明顯，而且已接近

6、自體皮膚移植組的愈合效果。 結論：明膠、殼聚糖和PVA以適當?shù)谋壤旌峡梢試L試作為真皮支架材料；＞10KD的成纖維細胞培養(yǎng)上清組分尤其對真皮的重建有積極的作用，復合控釋系統(tǒng)后克服了生長因子半衰期短，其進入體內后迅速擴散、變性或酶解，應用效果不甚理想的弊病，既可避免毒副作用，又能加快上皮和結締組織生長；同時加入明膠-殼聚糖-PVA凍干材料這一載體進一步加強了對真皮缺損愈合的能力，使之為平戰(zhàn)時皮膚創(chuàng)傷修復的臨床應用奠定了一定的基礎。