微粒皮結合人工真皮構建組織工程皮膚修復創(chuàng)面的初步研究.pdf

1、目的:研究微粒皮結合人工真皮支架構建的組織工程皮膚對大鼠背部創(chuàng)面的修復效果。
　　材料與方法:取SD大鼠隨機分為4組制備大鼠背部創(chuàng)面模型。使用微粒皮結合人工真皮支架構建的組織工程皮膚修復大鼠背部創(chuàng)面(D組),分別于術后第一、三、五周觀察創(chuàng)面生長情況,并與空白對照組(A組)、人工真皮移植組(B組)、自體原位微粒皮移植組(C組)比較各組創(chuàng)面愈合質量。通過如下指標評價研究此種組織工程皮膚對創(chuàng)面的修復效果。
　　1.通過大體標本的肉

2、眼觀察、對創(chuàng)面收縮率、愈合率的測算及HE染色情況分析對創(chuàng)面修復給出大體評價。
　　2.表皮修復情況:通過掃描電鏡(GEM)對表皮全層厚度的觀察評價表皮層修復質量。并在表皮修復中,通過CK15、CD29免疫組化的結果觀察皮膚干細胞的分布,探索皮膚干細胞在創(chuàng)面修復中的作用。
　　3.真皮修復情況:通過Masson染色觀察創(chuàng)面真皮層膠原纖維的密度、質地及結構;通過掃描電鏡(SEM)對真皮全層厚度的觀察綜合評價真皮層修復質量。并在此

3、基礎上進一步行RT-PCR測定真皮中Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達。
　　結果:四組大鼠背部創(chuàng)面的修復過程中,使用微粒皮結合人工真皮支架構建的組織工程皮膚對大鼠背部創(chuàng)面具有最佳修復效果,大體觀察5周時已達到臨床愈合。各組創(chuàng)面在術后第一周時,收縮都十分有限,并未顯示出差別;術后第三周各組創(chuàng)面均有了較大幅度的收縮,A組表現(xiàn)尤為突出,B、C組次之,D組最輕收縮率僅為29.0±2.4％;術后第五周各組創(chuàng)面繼續(xù)收縮,A組的收縮趨于平穩(wěn),其他三組

4、創(chuàng)面收縮率均較A組輕,三組之間收縮率的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。術后第一周時,A、B組愈合率明顯較小,D組愈合較好,C組最佳;術后第三周時B組覆蓋面積最小,僅53.8±5.5％,其余各組創(chuàng)面進行性愈合,愈合率均超過70％;術后第五周時各組創(chuàng)面愈合率均超過80％,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。術后第五周SEM觀察B、C、D三組之間的表皮全層厚度無差別,各組數據差異未見明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05),但A組表皮全層厚度小于其他三

5、組(P＜0.01)。創(chuàng)面CK15、CD29免疫組化的結果在一定程度上具有一致性,顯示表皮干細胞較為集中地分布在創(chuàng)面表皮全層、基底膜、毛囊附近及新生腺體結構,在創(chuàng)面全層的結構中也有散在的分布,且CK15、CD29免疫組化PU值的水平變化反映來自于微粒皮的表皮干細胞在參與創(chuàng)面修復的過程中有所消耗。
　　HE染色觀察創(chuàng)面經過炎性細胞浸潤和血管增生后有所退縮,可見表皮下毛囊向表皮聚集,并參與表皮修復,支架材料已基本被自身膠原取代。Mass

6、on染色低倍鏡下觀察術后第一、三、五周四組創(chuàng)面厚度,B、D兩組均不同程度高于A、C兩組。創(chuàng)面修復過程中真皮層膠原纖維重構,排列趨于整齊。術后第五周時,A組創(chuàng)面膠原密度仍最小,排列較松散;B、D兩組人工真皮結構基本已被自體新生膠原所替代,并且D組中漸與微粒皮中的膠原成分融為一體。C、D兩組創(chuàng)面中成纖維細胞較A、B兩組更為密集。術后第五周SEM觀察含有人工真皮修復的B、D兩組真皮全層厚度明顯大于未使用的A、C兩組:其中D組真皮全層厚度最大為

7、768.2±24.22μm,接下來依次為B組、A組,C組真皮全層厚度最小。對D組真皮細微結構的觀察顯示其真皮層兼具微粒皮和人工真皮兩組的修復特點,真皮層上層為排列紊亂的粗大波形的膠原,膠原問的空隙較大,下層膠原束平行排列,致密有序,膠原纖維之間空隙較小兩層之間有過渡,形成較為成熟的層次和結構。RT-PCR檢測C、D兩組Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達水平,兩組創(chuàng)面Ⅰ型膠原的表達水平總體較高,且D組Ⅰ型膠原的條帶寬度亮度在各時間點均超過C組,尤