卵巢上皮性腫瘤中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景： 在腫瘤發(fā)生過(guò)程中，其增生速度超過(guò)血管生成的速度而造成局部缺氧，腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境所采取的策略是提高糖酵解速率和形成多血管體系。缺氧誘導(dǎo)因子1(hypoxia-induciblefactor-1，HIF-1)是缺氧狀態(tài)下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體細(xì)胞內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子，其HIF-1α亞單位是惟一的氧調(diào)節(jié)亞單位，它決定HIF-1的活性。HIF-1的靶基因涉及腫瘤細(xì)胞能量代謝、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移和離子代謝等，其在腫瘤病理中的

2、作用和地位日益引起重視。我們正是基于此檢測(cè)了HIF-1α在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)，初步探討了其在腫瘤發(fā)展中的作用，為卵巢癌的診治提供新的思路和途徑。 第一部分卵巢上皮性腫瘤中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá) 目的： 探討卵巢上皮性腫瘤中缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的表達(dá)及其與卵巢癌臨床病理特征的相互關(guān)系及臨床意義。 方法： 1.收集2000年至2004年西南醫(yī)院病理科卵巢上皮性腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本蠟塊共

3、計(jì)87例，其中卵巢上皮性癌44例(患者年齡22-66歲，平均49歲，≤50歲23例，＞50歲21例；漿液性囊腺癌25例，粘液性囊腺癌6例，子宮內(nèi)膜樣癌7例，透明細(xì)胞癌2例，未明確型腺癌4例；高分化9例，中分化18例，低分化17例；臨床Ⅰ期9例，Ⅱ期1例，Ⅲ期30例，Ⅳ期4例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例)；卵巢上皮性交界性腫瘤11例(交界性漿液性囊腺瘤7例，交界性粘液性囊腺瘤4例)；卵巢上皮性良性腫瘤32例(漿液性囊腺瘤18例

4、，粘液性囊腺瘤14例)。 2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(EnVisionTM+二步染色法)檢測(cè)了上述標(biāo)本中HIF-1α蛋白表達(dá)水平，以磷酸鹽緩沖液代替一抗染色作為陰性對(duì)照。光鏡觀察結(jié)果并確定蛋白的表達(dá)情況。 3.分析HIF-1α在卵巢上皮性良性腫瘤、交界性腫瘤和卵巢癌組織的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理資料分析了HIF-1α與卵巢癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織類型、病理分級(jí)等臨床病理特征間的關(guān)系。 結(jié)果： 1.在卵巢

5、上皮性良性腫瘤中HIF-1α陰性表達(dá)，而交界性及惡性腫瘤組織中都有HIF-1α表達(dá)，有顯著差異(均為P＜0.05)。HIF-1α在卵巢上皮性癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為63.64％(28/44)，表達(dá)強(qiáng)度多為+和++級(jí)陽(yáng)性表達(dá)，少數(shù)為+++級(jí)表達(dá)；在卵巢上皮性交界性腫瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率為54.55％(6/11)，表達(dá)強(qiáng)度多為+級(jí)陽(yáng)性表達(dá)，無(wú)+++級(jí)表達(dá)；但二者無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 2.HIF-1α蛋白的表達(dá)在卵巢癌各個(gè)病理分級(jí)

6、、組織類型、患者年齡間比較，差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，而臨床分期間有顯著性差異(P＜0.05)，其表達(dá)強(qiáng)度隨臨床分期的增高而加強(qiáng)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，二者有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論： HIF-1α在卵巢上皮性癌中呈高表達(dá)，并與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯關(guān)系，提示HIF-1α在卵巢癌的進(jìn)展中可能起著重要作用。 第二部分缺氧誘導(dǎo)因子-1α與卵巢癌血管生成、細(xì)胞增殖

7、的關(guān)系 目的： 1.研究卵巢上皮性癌中HIF-1α、環(huán)氧化酶-2(COX-2)、CD34表達(dá)及其相關(guān)關(guān)系，探討HIF-1α與腫瘤血管生成關(guān)系及可能途徑； 2.研究卵巢上皮性癌中HIF-1α、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)及其相關(guān)關(guān)系，探討HIF-1α與腫瘤細(xì)胞增殖活性可能關(guān)系。 方法： 1.收集卵巢上皮性癌44例標(biāo)本蠟塊(同第一部分)。 2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(EnVisionTM+二步

8、染色法)檢測(cè)了上述標(biāo)本中COX-2、CD34、PCNA蛋白表達(dá)水平，以磷酸鹽緩沖液代替一抗染色作為陰性對(duì)照。光鏡觀察結(jié)果并確定這三種蛋白的表達(dá)情況，計(jì)數(shù)微血管密度(MVD)。 3.結(jié)合臨床病理資料分析了COX-2、CD34和PCNA與腫瘤臨床分期、組織類型、病理分級(jí)等臨床病理特征間的關(guān)系。 4.分析HIF-1α、COX-2、CD34之間的關(guān)聯(lián)性，HIF-1α與PCNA之間的關(guān)聯(lián)性。 結(jié)果： 1.COX-2

9、主要在腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)。COX-2蛋白的表達(dá)在卵巢癌各個(gè)病理分級(jí)、組織類型間比較，差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)；而臨床分期有顯著性差異(P＜0.05)，晚期患者的COX-2表達(dá)明顯高于早期患者。MVD在各個(gè)臨床分期、病理分級(jí)均有顯著性差異(P＜0.05)，隨臨床分期增加、細(xì)胞分化程度降低，MVD增加。與患者組織類型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。HIF-1α表達(dá)與MVD有關(guān)聯(lián)性(r=0.574，P＜0.05)；COX-2表達(dá)與MVD有關(guān)聯(lián)性

10、(r=0.627，P＜0.05)；HIF-1α與COX-2表達(dá)亦有關(guān)聯(lián)性(r=0.666，P＜0.05)。 2.PCNA主要在腫瘤細(xì)胞的胞核內(nèi)表達(dá)。PCNA指數(shù)在卵巢癌各個(gè)臨床分期、病理分級(jí)均有顯著性差異(P＜0.05)，與患者組織學(xué)類型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。晚期患者的PCNA指數(shù)明顯高于早期患者；隨分化程度降低，PCNA指數(shù)增高。HIF-1α蛋白的表達(dá)與PCNA有關(guān)聯(lián)性(r=0.583，P＜0.05)，即PCNA指數(shù)隨著HIF

11、-1α表達(dá)程度增強(qiáng)而升高。 結(jié)論： 1.HIF-1α表達(dá)與COX-2、MVD有關(guān)聯(lián)性，提示HIF-1α過(guò)度表達(dá)與卵巢癌血管生成密切相關(guān)，HIF-1α可能與COX-2路徑一起調(diào)節(jié)卵巢癌血管生成，HIF-1α可能是卵巢癌抗血管生成的一個(gè)重要靶因子。 2.HIF-1α表達(dá)與PCNA有關(guān)聯(lián)性，提示HIF-1α可能與卵巢癌細(xì)胞增殖活性密切相關(guān)。 討論 缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF-1)是哺乳動(dòng)物和人體細(xì)胞內(nèi)存在著

12、的一類介導(dǎo)缺氧適應(yīng)性反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子。HIF-1α是惟一的氧調(diào)節(jié)亞單位，受缺氧調(diào)控并調(diào)節(jié)HIF-1的活性，此外某些抑癌基因的失活、癌基因的激活以及多種生長(zhǎng)因子均與HIF-1的活性密切相關(guān)。由于腫瘤中缺氧環(huán)境及這些癌基因和抑癌基因的突變，HIF-1活化并與缺氧反應(yīng)基因的缺氧反應(yīng)元件上的HIF-1的結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合，從而誘導(dǎo)其下游的相關(guān)靶基因的表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧、能量代謝、腫瘤血管生成及增殖、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用。 近年來(lái)，許多學(xué)

13、者發(fā)現(xiàn)多種腫瘤組織中HIF-1α呈陽(yáng)性表達(dá)。我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：卵巢上皮良性腫瘤、交界性腫瘤和惡性腫瘤的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度呈上升趨勢(shì)，且HIF-1α表達(dá)與卵巢癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，說(shuō)明HIF-1α表達(dá)在卵巢癌形成的早期階段，并隨著腫瘤的進(jìn)展而增高。HIF-1α在卵巢腫瘤由良性向惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能起著某種重要作用。 活躍的血管生成是包括卵巢癌在內(nèi)的許多實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中普遍存在的病理現(xiàn)象。本研究顯示：卵

14、巢癌組織內(nèi)HIF-1α蛋白的表達(dá)與腫瘤內(nèi)MVD計(jì)數(shù)有關(guān)聯(lián)性，提示HIF-1α在促進(jìn)卵巢癌微血管形成中可能起一定作用。已知COX-2有促進(jìn)血管生成的作用，我們實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)卵巢癌組織中HIF-1α與COX-2有關(guān)聯(lián)性，說(shuō)明HIF-1α可能與COX-2路徑一起調(diào)節(jié)卵巢癌血管生成，是對(duì)HIF-1α通過(guò)VEGF依賴途徑調(diào)節(jié)腫瘤血管生成的有意補(bǔ)充。 腫瘤細(xì)胞最根本的生物學(xué)特征是無(wú)限制的增殖，其增殖活性與腫瘤的生物學(xué)行為，特別是腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移