bFGF對(duì)H-,2-O-,2-誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的影響以及ERK1-2通路在其中的作用.pdf

1、目的：探討堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的PCI2細(xì)胞凋亡的影響及其發(fā)揮作用的可能分子機(jī)制。 方法：本研究采用不同濃度的H2O2處理PCI2細(xì)胞24h，建立細(xì)胞損傷模型。用不同濃度的bFGF預(yù)處理細(xì)胞2h后加入(125μM)H2O2共同作用24h以探討bFGF的保護(hù)作用。采用(125μM)H2O2作用PCI2細(xì)胞24h建立體外細(xì)胞凋亡模型，觀察

2、bFGF對(duì)(125μM)H2O2誘導(dǎo)的PCI2細(xì)胞凋亡的影響。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率，Hoechst332558核染色進(jìn)行細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)分析，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)量，分光光度法檢測(cè)PC12細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)的活性，WesternBlotting方法檢測(cè)PC12細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化ERK1/2蛋白的含量以探討bFGF作用機(jī)制。 結(jié)果：

3、 1.H2O2可以顯著降低PC12細(xì)胞的存活率，在50～175μM濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量相關(guān)性，隨著H2O2濃度增加，對(duì)PC12細(xì)胞的毒性也增加；bFGF預(yù)處理細(xì)胞2h可以顯著減輕H2O2對(duì)PC12細(xì)胞的損傷，在5～80ng/mL范圍內(nèi)，bFGF可以劑量依賴性拮抗H2O2對(duì)PC12細(xì)胞的損傷作用，隨著bFGF濃度增加，PC12細(xì)胞的存活率也增加； 2.(125μM)H2O2作用PC12細(xì)胞24h可以顯著降低細(xì)胞內(nèi)SOD的活性，(4

4、0ng/mL)bFGF預(yù)處理細(xì)胞2h可顯著拮抗(125μM)H2O2引起的SOD活性的降低，其細(xì)胞內(nèi)SOD活性較僅用(125μM)H2O2組升高37.49％； 3.(125μM)H2O2作用PC12細(xì)胞24h可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而(40ng/mL)bFGF預(yù)處理細(xì)胞2h對(duì)(125gM)H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡有明顯的抑制作用；預(yù)先用(10μM)U0126(MEK1/2的特異性阻斷劑)作用細(xì)胞30min阻斷ERK1/2信號(hào)傳導(dǎo)途

5、徑后，bFGF拮抗PC12細(xì)胞凋亡的作用被部分抑制： 4.(125μM)H2O2作用PC12細(xì)胞4h可顯著增加PC12細(xì)胞內(nèi)Caspase-3的活性，并且這種活化作用可以被(40ng/mL)bFGF預(yù)處理細(xì)胞2h所抑制； 5.(125μM)H2O2刺激PC12細(xì)胞10min、(40ng/mL)bFGF刺激PC12細(xì)胞15min均能激活ERK1/2信號(hào)傳導(dǎo)途徑，使PC12細(xì)胞內(nèi)ERK1/2高水平磷酸化；(40ng/mL)b

6、FGF先刺激細(xì)胞15min后，再用(125μM)H2O2作用細(xì)胞10min后ERK1/2的磷酸化水甲較僅用(125μM)H2O2刺激組顯著提高；但預(yù)先用(10μM)U0126作用細(xì)胞30min后，再用(40ng/ml)bFGF和(125μM)H2O2先后處理細(xì)胞，ERK1/2的磷酸化水平顯著降低。 結(jié)論： 1.在50～175μM濃度范圍內(nèi)，H2O2可以劑量依賴性降低PC12細(xì)胞存活率，該作用與降低細(xì)胞內(nèi)SOD活性、激活C