低氘水抗H2O2誘導的PC12細胞氧化損傷的作用及機制研究.pdf

1、[目的]：
　　比較不同氘體積濃度的低氘水對過氧化氫(H2O2)誘導PC12細胞株氧化損傷的作用及機制，為新的抗氧化藥物的開發(fā)提供實驗依據(jù)
　　[方法]：
　　首先，MTT法檢測不同濃度的H2O2對PC12細胞損傷的影響以確定造模濃度，接著采用MTT法檢測不同濃度的低氘水對PC12細胞生長增殖的影響以明確低氘水對正常PC12細胞有無毒性作用，最后采用MTT法檢測不同濃度的低氘水對過氧化氫誘導PC12細胞損傷的影響;采用

2、DCF-DA熒光探針結合熒光顯微鏡檢測不同濃度的低氘水作用后，細胞內活性氧(ROS)水平;免疫熒光技術檢測不同濃度的低氘水作用后細胞內相關抗氧化酶類超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的含量變化;western-blot檢測不同濃度低氘水作用后對細胞內PI3K-Akt/PKB信號通路中相關蛋白PTEN、p-PDK1、Akt、p-Akt、bcl-2和p-GSK-3β蛋白的表達變化水平。
　　[結果]：
　　1.不同濃

3、度的過氧化氫對PC12細胞損傷的影響:MTT結果顯示隨著H2O2濃度的升高，PC12細胞的增殖能力逐漸下降，在H2O2濃度為100μM的時候，細胞生長率為52％。
　　2.低氘水對PC12細胞增殖的影響:MTT結果顯示隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，PC12細胞的增殖能力不受影響(P＞0.05）。
　　3.低氘水對過氧化氫誘導PC12細胞損傷的影響:MTT結果顯示在100μM誘導的氧化損傷下，隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，PC12細胞的生

4、長率逐漸上升。
　　4.低氘水能夠降低H2O2誘導下細胞內活性氧(ROS)水平:ROS結果顯示隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，ROS水平逐漸降低。
　　5.低氘水能提高細胞內相關抗氧化酶類超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活力:CAT及SOD檢測結果顯隨著培養(yǎng)基中氘含量下降，PC12細胞內CAT及SOD酶活力上升。
　　6.低氘水影響PI3K-Akt/PKB信號通路中相關蛋白PTEN、p-PDK1、Akt、p-Ak