急性移植物抗宿主病(aGVHD)小鼠模型的建立及IL-10與aGVHD相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：
　　 1.利用SPF級近交系C57BL/6(H-2b，♂)小鼠作供鼠，SPF級近交系BALB/C(H-2d，♀)小鼠作受鼠建立異基因造血干細胞移植后aGVHD小鼠模型；
　　 2.探討外源性細胞因子白細胞介素-10(IL-10)與小鼠aGVHD的關(guān)系。
　　 方法：
　　 將受鼠分組：正常對照組；A1組(7Gy60Co照射組)；A2組(7Gy60Co照射移植組)；B1組(8Gy60Co照射組)；B

2、2組(8Gy60Co照射移植組)；C1組(9Gy60Co照射組)；C2組(9Gy60Co照射移植組)；D1組(9.5Gy60Co照射組)；D2(9.5Gy60Co照射移植組)；C3組(9Gy60Co照射移植干預(yù)組)。取供鼠骨髓細胞1×107個和脾細胞2×107個經(jīng)尾靜脈輸注給受鼠，IL-10干預(yù)組移植后+1d至+7d給予細胞因子IL-101μg/kg/d皮下注射。檢測以下相關(guān)指標(biāo)的變化：
　　 (1)觀察移植后受鼠的一般狀況、生

3、存期及生存率；
　　 (2)計數(shù)外周血白細胞變化；
　　 (3)常規(guī)組織病理切片，HE染色，顯微鏡下觀察病理改變；
　　 (4)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測嵌合體形成。
　　 結(jié)果：
　　 1.小鼠aGVHD模型的建立
　　 (1)不同照射劑量組小鼠一般狀況、生存期及生存率(觀察期30天)：單純照射小鼠A1組長期存活，生存期B1組＞C1組＞D1組(P＜0.05)，30天生存率A1組＞B1組＞

4、C1組＞D1組(P＜0.05)。移植小鼠A2組=B2組，且＞C1組＞D1組(P＜0.05)，C1組與D1組比較(P＞0.05)；30天生存率A1組=B1組，且＞C1組＞D1組(P＜0.05)；A2組小鼠沒有出現(xiàn)aGVHD表現(xiàn)，未形成嵌合體，移植物被排斥；B2組小鼠部分出現(xiàn)aGVHD表現(xiàn)，嵌合率檢測為33.3％；C2組小鼠出現(xiàn)明顯aGVHD表現(xiàn)，嵌合率檢測為83.3％；D2組小鼠出現(xiàn)aGVHD表現(xiàn)，嵌合率為66.7％。
　　 (2

5、)不同照射劑量組小鼠的白細胞變化：不同照射劑量的單純照射組均于照射后+7天白細胞計數(shù)降到最低，其中A1組白細胞計數(shù)高于其他各組(P＜0.05)，其余各組間無差異；隨著時間延長各組白細胞計數(shù)均升高，至+28天A1、B1組已達正常范圍；C1組小鼠白細胞計數(shù)于+14天為(0.81±0.28)×109/L，且波動于此范圍左右，至+20天全部死亡；D1組小鼠于+7天降到最低后波動于此水平，至+13天全部死亡。不同照射劑量各移植組均于移植后+7天白

6、細胞計數(shù)降到最低，其中A2組白細胞計數(shù)高于其他各組(P＜0.05)，其余各組間無差異，后漸上升，到+21天A2組仍高于B2組，但無統(tǒng)計學(xué)差異，A2組明顯高于C2組和D2組(P＜0.05)，B2組高于C2組和D2組，但無統(tǒng)計學(xué)差異，D2組小鼠于+30天內(nèi)全部死亡。
　　 (3)不同照射劑量移植組小鼠aGVHD的病理組織學(xué)變化：A2組小鼠未見aGVHD的病理學(xué)表現(xiàn)；B2組小鼠部分可見不典型的aGVHD的病理學(xué)表現(xiàn)；C2組小鼠可見明顯

7、的aGVHD的病理學(xué)表現(xiàn)，肝臟可見肝細胞腫大，細胞結(jié)構(gòu)不清，匯管區(qū)中央靜脈和肝血竇有擴張及淤血，肝血竇及匯管區(qū)有淋巴細胞浸潤；皮膚組織結(jié)構(gòu)破壞，毛囊減少，局部可見淋巴細胞浸潤；脾臟標(biāo)本脾小梁等正常結(jié)構(gòu)破壞，間有巨噬細胞和淋巴細胞侵潤，脾小體纖維化，脾細胞減少，部分可見脾竇擴張出血；小腸絨毛壞死脫落，腺體減少，可見淋巴細胞浸潤；D2組小鼠亦可見較典型的aGVHD改變。
　　 (4)嵌合體的檢測：移植后+14天A2組未檢測出Y染色體

8、，植入不成功；B2組、C2組和D2組均有供鼠Y染色體檢出，植入成功。
　　 2.IL-10在小鼠aGVHD中作用
　　 (1)兩組小鼠的一般狀況、生存期及生存率比較：C3組小鼠生存期長于C2組(P＞0.05)，30天生存率高于C2組為66.7％(P＞0.05)；該組小鼠倦怠、納差、脫毛、弓背等aGVHD表現(xiàn)輕于C2組。
　　 (2)C2組和C3組小鼠白細胞計數(shù)均于+7天降到最低值，此后漸上升，C3組上升速度快，至

9、+14天達(4.78±0.95)×109/L，高于C2組(P＜0.05)。
　　 (3)肝臟、脾、和皮膚的aGVHD組織病理學(xué)改變C3組明顯輕于C2組，小腸標(biāo)本C3組與C2組無明顯差異。
　　 (4)兩組嵌合體檢測：移植后+14天，C2組和C3組均有嵌合體檢出，兩組植入都成功。
　　 結(jié)論：
　　 (1)以C57BL/6(H-2b，♂)小鼠作供鼠，BALB/C(H-2d，♀)小鼠作受鼠，受鼠9Gy60Co