維生素D依賴性佝僂病IA型兩家系的臨床及分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、[目的]
　　分析2例維生素D依賴性佝僂病IA型（Vitamin D-dependent rickets type IA，VDDR-IA）患者的臨床特點(diǎn)、個(gè)體化治療及隨訪資料，以提高對(duì)本病的認(rèn)識(shí)和診治水平，并通過(guò)2個(gè)VDDR-IA患者家系CYP27B1基因突變分析，為VDDR-IA的臨床診斷和治療提供依據(jù)，同時(shí)也可豐富中國(guó)病例基因突變類型數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　[研究對(duì)象]
　　2例VDDR-IA患者及家系成員17人，另收集健康

2、志愿者101人作為對(duì)照，在獲得知情同意的情況下，由福建省福州兒童醫(yī)院內(nèi)分泌科專人采集外周血樣及收集相關(guān)病歷資料。所有受檢人員在此前均未接受過(guò)任何遺傳學(xué)相關(guān)檢測(cè)。
　　[研究方法]
　　1.臨床資料與方法
　　1.1.收集臨床相關(guān)資料：詳細(xì)記錄2例VDDR-IA患者及其家系成員的病史，進(jìn)行體格檢查，并完成相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢查及影像學(xué)檢查，對(duì)病歷資料進(jìn)行回顧性總結(jié)分析。
　　1.2.血清1,25-(OH)2D3水平測(cè)定：

3、抽取2例患者及其家系成員外周靜脈血，分離血清后應(yīng)用人1,25-(OH)2D3 ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清1,25-(OH)2D3水平測(cè)定。
　　2. CYP27B1基因測(cè)序分析
　　2.1.外周靜脈血基因組DNA提?。撼槿?例患者及其家系成員和101例健康對(duì)照組的外周靜脈血，采用TIANGEN血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。
　　2.2.PCR擴(kuò)增CYP27B1基因片段：參考文獻(xiàn)資料，應(yīng)用Oligo6軟件

4、進(jìn)行引物驗(yàn)證及 PCR條件分析后對(duì) CYP27B1基因9個(gè)外顯子及其內(nèi)含子相鄰區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定PCR擴(kuò)增最佳條件。
　　2.3.PCR產(chǎn)物測(cè)序和分析：所有PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物均經(jīng)過(guò)1.5％瓊脂糖電泳檢測(cè)后，送測(cè)序公司切膠純化后直接測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與Blastn中CYP27B1基因參考序列(NC_000012.11與NM_000785.3)進(jìn)行對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)存在的堿基變異。
　　[結(jié)果]
　　1.臨床資料：2

5、例患者均有嚴(yán)重的佝僂病癥狀、體征及影像學(xué)表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室檢查提示低鈣血癥、低磷血癥、血清堿性磷酸酶及甲狀旁腺激素水平顯著升高、血清25-(OH)D3水平升高，1,25-(OH)2D3水平明顯降低。兩家系其他成員無(wú)相關(guān)臨床表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果均正常。
　　2. CYP27B1基因測(cè)序結(jié)果：在2例VDDR-IA患者CYP27B1基因8號(hào)外顯子檢測(cè)到同一種純合子突變c.1319_1325dupCCCACCC，通過(guò)對(duì)其正常表型的父系及母系成員

6、的CYP27B1基因測(cè)序證實(shí)多人為雜合突變，101名正常對(duì)照個(gè)體CYP27B1基因相同位點(diǎn)測(cè)序未發(fā)現(xiàn)此突變。
　　3.患者的治療隨訪：予以骨化三醇和鈣劑個(gè)體化治療，2例患者癥狀明顯改善，實(shí)驗(yàn)室檢查提示生化指標(biāo)恢復(fù)正常，影像學(xué)檢查顯示骨骼損害明顯改善。
　　[結(jié)論]
　　本研究首次對(duì)來(lái)自中國(guó)同一小城市的2個(gè)完整大家系進(jìn)行了基因突變分析。兩例患者均為CYP27B1基因8號(hào)外顯子c.1319_1325dupCCCACCC純合