2型糖尿病患者巨噬細胞HB-EGF mRNA表達的半定量研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目前,對于巨噬細胞分泌的HB-EGF和糖尿病的關系,及糖尿病巨噬細胞HB-EGF表達調節(jié)的相關報道很少.該課題擬采用逆轉錄-聚合酶鏈反應分析糖尿病患者巨噬細胞HB-EGF的mRNA表達水平,探討HB-EGF在糖尿病動脈粥樣硬化中可能的作用.研究對象為該院就診的44例2型糖尿病患者,和34例性別、年齡、體重指數(shù)與之匹配的正常對照者.取外周血,用Ficoll分離得到單個核細胞,根據(jù)單核細胞對塑料的貼壁特性,在塑料培養(yǎng)皿中用PRMI1640培

2、養(yǎng)基分離培養(yǎng),并以20﹪自體血清刺激分化為巨噬細胞.4天后收集巨噬細胞,用免疫組化法證實.用Trizol提取巨噬細胞的總RNA,以Oligo dT為引物逆轉錄成cDNA,采用合成的特異性引物(HB-EGF:上游TGG TGC TGA AGC TCT TT以TGG,下游GTG GGA ATT AGT CAT GCC CAA;β-actin:上游TCG ACA ACG GCT CCG GCA,下游CGT ACA TGG CTG GGG TG

3、T)進行聚合酶鏈反應,得到目的片段HB-EGF605bp,其中β-actin370bp為內參照.2﹪凝膠電泳分離擴增產物后,回收純化目的片段,直接測序.將電泳條帶用凝膠成像系統(tǒng)分析軟件進行定量分析,計算HB-EGF的相對表達量.結果顯示,與對照組HB-EGF mRNA水平(0.473±0.210)相比,2型糖尿病巨噬細胞HB-EGF mRNA水平(0.876±0.422)明顯增高(P<0.05),而且HB-EGF mRNA表達水平與空腹

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