新型鈣離子拮抗劑JTV逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的K562-MDR細(xì)胞多藥耐藥的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文新型鈣離子拮抗劑JTV逆轉(zhuǎn)Pgp介導(dǎo)的K562MDR細(xì)胞多藥耐藥的研究姓名：車曉芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：劉云鵬2001.4.1染的K562MDR細(xì)胞在含10%胎牛血清(FCS)的RPMI1640培養(yǎng)液中，KB一C:細(xì)胞在含10%FCS的MEM培養(yǎng)液中常規(guī)37℃條件下傳代培養(yǎng)。二、膜泡的制備:1x10，細(xì)胞懸于buferA(lOmMTris一HCIpH7.40.25MSucrose0.2mMCaC

2、l2)中，4℃下加氮?dú)鈮?8kgc擴(kuò)30min后，懸于buferB(IOmMTri，一HCIpH7.40.25MSucrose)中，離心后取上清鋪于35%的蔗搪墊(lommTri。一HCIpH7.435%Sucrose1mMEDTA)上，16000xg30min，取中間層100000xg45min，將沉淀重懸于buferB中，Bradford法進(jìn)行蛋白定量，一50℃保存。三、K562MDR細(xì)胞P一9p表達(dá)的檢測(cè):應(yīng)用Westernblo

3、t及流式細(xì)胞儀檢測(cè)K562MDR細(xì)胞P一9p的表達(dá)。四、K562MDR細(xì)胞藥物敏感性的檢測(cè):用MTT法檢測(cè)K562及K562MDR細(xì)胞對(duì)各種藥物的敏感性。五、K562MDR細(xì)胞內(nèi)ADM的蓄積和排出的檢測(cè):用流式細(xì)胞儀檢測(cè)K562及K562MDR細(xì)胞內(nèi)ADM的蓄積和排出。六、ITV對(duì)P一Bp作用的檢測(cè):用，H一Azidopine光親和性標(biāo)記來檢測(cè)JTV對(duì)P一9P的作用。七、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所得數(shù)據(jù)用均值加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，顯著性檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)P0