環(huán)孢菌素A聯(lián)合雌激素受體抑制劑逆轉K562-A02細胞多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：本課題旨在研究環(huán)孢菌素A(CsA)聯(lián)合雌激素受體抑制劑雷洛昔芬(raloxifene)單獨及聯(lián)合應用對人慢性粒細胞白血病急性紅白血病變細胞株K562及其耐藥細胞株K562/A02 P糖蛋白(P.glycoprotein，P-gP)表達的影響，以探討它們逆轉多藥耐藥的作用機理，為環(huán)孢菌素A和雌激素受體抑制劑雷洛昔芬作為耐藥逆轉劑的臨床應用提供理論依據(jù)。 方法：(1)采用甲基四唑藍法(MTT)法檢測雷洛昔芬(2.5mg/L)及

2、CsA(1ing/L)單獨及聯(lián)合作用于K562細胞和K562/A02細胞一定時間柔紅霉素fDNR)對細胞的半數(shù)抑制量：(2)采用半定量PCR(RT-PCR)法檢測K562細胞、雷洛昔芬(2.5mgm)及CsA(1mg/L)單獨及聯(lián)合作用于K562/A02細胞一定時間細胞多藥耐藥基因(mdrl基因)mRNA表達水平：(3)采用流式細胞儀(FCM)檢測K562細胞、雷洛昔芬(2.5mg/L)及CsA(1mg/L)單獨及聯(lián)合作用于K562/A

3、02細胞一定時間細胞膜上P-gP的表達。(4)FCM檢測K562細胞、雷洛昔芬(2.5mg/L)及CsA(1 mg/L)單獨及聯(lián)合作用于K562/A02細胞一定時間細胞內(nèi)DNR濃度。(5)FCM檢測雷洛昔芬(2.5mg/L)及CsA(1mg/L)單獨及聯(lián)合作用于K562/A02細胞一定時間細胞的凋亡。 結果：(1)逆轉劑處理前后DNR對K562細胞和K562/A02細胞的毒性作用：OK562/A02、K562細胞IC50值分別為

4、23.51和0.29mg/L<,1>②雷洛昔芬及CsA單獨聯(lián)合處理K562細胞IC50值無明顯影響：③雷洛昔芬及CsA單獨處理K562/A02細胞的IC50值分別為5.98、8.15 mg/L，兩藥聯(lián)合作用增強IC50值為3.68mg/L：(2)未加逆轉劑K562/A02耐藥株細胞48h凋亡率為9.73﹪；K562/A02經(jīng)CsA(1mg/L)，雷洛昔芬(2.5mg/L)及CsA(1mg/L)+雷洛昔芬(2.5mg/L)聯(lián)合作用48h，

5、凋亡率分別為30.34﹪，10.10﹪，30.53﹪。本組實驗顯示小劑量的CsA可以誘導部分細胞凋亡，小劑量的雷洛昔芬無誘導細胞凋亡的作用。(3)RT-PCR檢測細胞mdrl mRNA的表達：①K562細胞mdrlmRNA表達為陰性,K562/A02細胞mdrl mRNA表達為陽性：②K562/A02細胞的空白對照組mdrl/β-action為1.313，CsA組為1.232，雷洛昔芬組為1.052，兩藥聯(lián)合組為0.449，我們對下調(diào)率

6、進行了分析，CsA及雷洛昔芬單獨作用后耐藥株mdrlmRNA下調(diào)微弱，聯(lián)合用藥下調(diào)效果明顯；(4)FCM檢測細胞膜P-gp的表達水平的變化：K562敏感株、K562/A02耐藥株P-gp熒光強度分別為3.58及104.96。后者經(jīng)CsA、雷洛昔芬及CsA和雷洛昔芬聯(lián)合作用48h,P-gp熒光強度分別為78.29，85.02和57.89。CsA及雷洛昔芬處理過的耐藥株P-gp蛋白的熒光強度下調(diào)，兩藥聯(lián)合下調(diào)更明顯，具有協(xié)同作用。(5)FC

7、M檢測細胞內(nèi)DNR濃度：①K562/A02耐藥株細胞內(nèi)DNR濃度為K562敏感株的12﹪；②K562/A02經(jīng)CsA雷洛昔芬及兩藥聯(lián)合作用48h，細胞內(nèi)DNR濃度分別為K562敏感株的33﹪，12.78﹪和45.29﹪。CsA處理組及CsA聯(lián)合雷洛昔芬處理組，細胞內(nèi)DNR濃度明顯增加，與K562/A02對照組間有顯著性差異。細胞內(nèi)部的DNR濃度上升，與MTT法所反映的細胞存活率下降是一致的。數(shù)據(jù)資料以x±sD表示，用SPSS11.0統(tǒng)計