FAT逆轉(zhuǎn)K562-A02細(xì)胞多藥耐藥及其機(jī)理的研究.pdf

1、多藥耐藥(Multidrug resistance，MDR)是腫瘤細(xì)胞接觸一種抗腫瘤藥物后不僅對(duì)該藥產(chǎn)生耐藥性，而且對(duì)其它結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的多種抗腫瘤藥物也產(chǎn)生交叉耐藥性，從而大大降低了抗腫瘤藥物的療效。當(dāng)今MDR是腫瘤化療失敗的主要原因之一，抗藥性機(jī)制及抗藥性克服途徑的探討已成為腫瘤研究的重大課題。對(duì)于腫瘤MDR的研究，目前已知有多種機(jī)制參與，包括藥物運(yùn)輸/攝取如P糖蛋白(Permeability-glycrotein，Pgp，P-

2、170)；代謝解毒谷胱甘肽(Glutathion，GSH)及其酶系統(tǒng)；藥物作用效靶如DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II(Topo II)；DNA損傷修復(fù)；凋亡途徑(如bcl-2、P53基因)改變等。其中認(rèn)識(shí)最早并且研究最深入的是Pgp/mdrl介導(dǎo)的MDR，也稱(chēng)經(jīng)典MDR。 目前許多MDR逆轉(zhuǎn)方法被發(fā)現(xiàn)。鈣離子通道阻滯劑維拉帕米(Verapamil，VRP，異博定)、環(huán)孢霉素A(CSA)及多種多樣的親脂性陽(yáng)離子化合物雖有部分或完全的MDR逆轉(zhuǎn)

3、作用，但同時(shí)伴隨有心臟毒性、免疫抑制、腎毒性等嚴(yán)重毒副作用，而使其臨床應(yīng)用受到限制。尋找高效而毒副作用小又能克服MDR的逆轉(zhuǎn)劑有著十分重要的意義。理想的MDR逆轉(zhuǎn)劑應(yīng)具備下列特征：對(duì)正常的組織細(xì)胞無(wú)毒性；體內(nèi)能獲得的藥物濃度在體外有逆轉(zhuǎn)MDR的活性；穩(wěn)定且半衰期長(zhǎng)；代謝物仍有活性。 K562/A02細(xì)胞是有典型MDR表型的人白血病細(xì)胞株，由慢性粒細(xì)胞白血病(CML)紅系急變敏感細(xì)胞系K562/S衍生而成，具有Pgp高表達(dá)，mdr

4、l mRNA高表達(dá)，Topo IImRNA低表達(dá)，GST活性高等生物學(xué)特性。本課題應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)法、生物化學(xué)法進(jìn)行FAT逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞多藥耐藥機(jī)理的研究，為臨床應(yīng)用提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.MTT法測(cè)定FAT對(duì)K562細(xì)胞和K562/A02細(xì)胞增殖的影響。 2.流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定FAT對(duì)K562細(xì)胞和K562/A02細(xì)胞內(nèi)Rho-123積聚濃度的影響。 3.流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定FAT對(duì)K562/A

5、02細(xì)胞Pgp表達(dá)水平的影響。 4.DTNB法測(cè)定FAT對(duì)K562/A02細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量的影響。 結(jié)論： 1.FAT低濃度時(shí)對(duì)K562／A02細(xì)胞和K562細(xì)胞均無(wú)直接細(xì)胞毒作用，但是能明顯降低阿霉素對(duì)K562／A02細(xì)胞的IC50值，逆轉(zhuǎn)效果與劑量相關(guān)；而對(duì)于K562細(xì)胞無(wú)明顯影響。 2.FAT可增加K562／A02細(xì)胞內(nèi)羅丹明123含量，且與劑量相關(guān)，而對(duì)于K562細(xì)胞無(wú)明顯影響。 3.K