蛋氨酸腦啡肽(MEK)抗B型流感病毒感染作用的研究.pdf

1、流行性感冒是由流感病毒引起的急性病毒性呼吸道傳染病，是對人類健康威脅最大的傳染病之一。其發(fā)病率居傳染病首位。迄今為止最有效的防治流感病毒的手段是接種流感疫苗。目前尚缺乏可靠的方法對流感發(fā)生與流行的周期性進行有效預測，這給流感疫苗的生產(chǎn)帶來困難。因此抗流感病毒物質(zhì)的研究，是目前各國研究的重點。蛋氨酸腦啡肽(Methionine Enkephalin，MEK)是哺乳動物體內(nèi)自然生成的，由腎上腺產(chǎn)生的前激素和前腦啡肽衍生而來。已有研究表明人體

2、內(nèi)免疫細胞廣泛存在MEK受體，適宜濃度MEK能通過與受體作用顯著提高機體免疫功能。MEK在流感病毒感染的小鼠中能顯著增加體液免疫和細胞免疫功能，MEK與其它抗病毒藥合用能治療病毒性肺炎，顯著延長受感染動物的生存期。MEK可以推遲HIV感染者病程，減輕癥狀，增加體內(nèi)的CD4+T細胞、NK細胞數(shù)量，CTL細胞的活性，增加IL-2、干擾素等細胞因子的產(chǎn)生。有人把它稱作治療性疫苗。本研究通過實驗探討MEK抗B型流感病毒感染的作用，為MEK作為預

3、防流感疫苗的應用提供理論依據(jù)。
　　 材料和方法：
　　 一、實驗材料
　　 1、主要試劑及藥品：MEK：批號：63231，分子量：574，美國Penta-biotech。
　　 2、B型流感病毒液(滴度為1：64)，由遼寧省CDC保存并傳代毒株。
　　 3、雞胚：8-11日齡雞蛋由遼寧省朝陽北票種雞廠提供。
　　 4、狗腎細胞系(Medin-Darby canine kidney，MDC

4、K)細胞：孵育培養(yǎng)24小時的第17-18代MDCK單層細胞由遼寧省CDC傳代細胞系。
　　 二、實驗方法
　　 1、MEK抗B型流感病毒感染MDCK細胞實驗
　　 試驗分組：MEK設(shè)10-5，10-6，10-7，10-8，10-9，10-10，10-11，10-12，10-13，10-14mol/L等濃度組，每組設(shè)4孔平行實驗，同時設(shè)空白對照和病毒對照?？瞻讓φ战M：加入200ul病毒維持液。病毒對照組：加入100

5、TCID50流感病毒和病毒維持液各100ul，其余各組按不同的先后次序分別加入MEK和100TCID50 B型流感病毒各100ul，在34℃5％CO2孵育72小時后觀察細胞病變，置于-70℃凍融后做血凝實驗。
　　 2、MEK抗B型流感病毒感染雞胚實驗
　　 試驗分組：根據(jù)預實驗設(shè)MEK10-12mol/L，同時設(shè)空白對照和病毒對照?？瞻讓φ战M加入200ul生理鹽水，病毒對照加入100EID50流感病毒和生理鹽水各100

6、ul，10-12mol/LMEK組按不同的先后次序分別加MEK和100EID50 B型流感病毒各100ul，在34℃孵育72小時，置于-20℃1小時取尿囊液做血凝實驗。
　　 實驗結(jié)果：
　　 1、MEK抗B型流感病毒感染MDCK細胞實驗
　　 空白對照組無細胞病變，無血凝。病毒對照和其他組均出現(xiàn)細胞病變，病毒滴度為1：64。
　　 2、MEK抗B型流感病毒感染雞胚實驗
　　 空白對照組無血凝；病

7、毒對照組HA滴度為1：64；先注射10-12 Mol/L MEK溫育24小時后再注入B型流感病毒組，HA滴度為6.8±1.93與病毒對照組比較P<0.01有統(tǒng)計學意義。
　　 討論：
　　 MEK是參與神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的重要物質(zhì)。研究證明T淋巴細胞、巨噬細胞，自然殺傷細胞(NK)等均含有MEK受體，適宜濃度的MEK與受體結(jié)合具有激活免疫細胞作用，特別是增加T淋巴細胞活性。
　　 通過MEK抗B型

8、流感病毒感染實驗，未見MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK細胞株的作用但可見MEK抗B型流感病毒感染雞胚的作用，表明了MEK可能通過免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)增加干擾素，白介素等多種細胞因子的產(chǎn)生，這些因子在病毒復制周期中的一個或多個環(huán)節(jié)，作用于靶細胞，通過阻滯病毒復制，或通過誘導一系列抗病毒蛋白質(zhì)干擾其復制，或抑制病毒生活周期中的某些關(guān)鍵成分，增強機體的抗病毒的能力，具體機制正在進一步深入研究之中。本研究為MEK.將來作為人類非特導性保護性疫苗，提