CCNE1及其剪接異構(gòu)體表達與胃癌發(fā)生的關(guān)系.pdf

1、[目的]在基因和蛋白水平檢測胃癌組織中CCNE1的表達，研究其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，從CCNE1表達調(diào)控機制出發(fā)選擇其剪接異構(gòu)體，進一步檢測基因剪接異構(gòu)體在胃癌原發(fā)組織及其配對癌旁正常組織中的表達，探討CCNE1及其基因剪接異構(gòu)體與胃癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。
　　 [方法]2007年9月到2009年7月收集34例實施胃癌根治術(shù)的患者的手術(shù)切除標本，所選取標本均于術(shù)后1小時內(nèi)取回、分裝并于液氮凍存；通過生物信息學方法-Oncomin

2、e(腫瘤微陣列數(shù)據(jù)庫)分析CCNE1在胃癌原發(fā)灶及其配對正常組織中的差異表達情況。根據(jù)生物信息學的預測結(jié)果，采用SYBR Green-實時定量熒光PCR技術(shù)檢測34例手術(shù)切除的胃癌原發(fā)組織、癌旁正常組織配對樣本中CCNE1基因及其2種基因替換剪接異構(gòu)體(CCNE1 typeⅡ、CCNE1 typeⅢ)的mRNA的相對表達變化，并分析CCNE1基因及其替換剪接異構(gòu)體的相對表達變化與疾病分期之間的關(guān)系。采用組織芯片/組織微陣列(TMA)技術(shù)

3、結(jié)合免疫組織化學方法(EnVision二步法)檢測CCNE1在34例配對樣本中的蛋白表達情況及亞細胞定位，并分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　　 [結(jié)果]胃癌原發(fā)灶CCNE1 mRNA表達水平顯著高于癌旁正常組織(P＜0.01)，在胃癌組織中CCNE1 mRNA表達水平在Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期均呈現(xiàn)顯著上調(diào)(P=0.042，P=0.016)。CCNE1替換剪切異構(gòu)體CCNE1 typeⅡ和CCNE1 typeⅢ經(jīng)SYBR Gree

4、n-real time PCR檢測顯示同癌旁正常組織相比較，兩種異構(gòu)體在胃癌原發(fā)灶中表達上調(diào)(P=0.015，P=0.019)，異構(gòu)體CCNE1 typeⅠ、CCNE1 typeⅣ的表達水平在胃癌原發(fā)組織和癌旁正常組織中差異無統(tǒng)計學意義(P=0.383，P=0.412).組織微陣列(TMA)技術(shù)結(jié)合免疫組化方法顯示：在胃癌原發(fā)組織中CCNE1蛋白陽性表達率(14/34)顯著高于癌旁正常組織0％(0/34)及胃炎組織0％(0/34)(P＜