TCF4N剪接異構(gòu)體在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、選擇性剪接( alternative splicing)是指從一個mRNA前體通過在不同的剪接位點(diǎn)發(fā)生組合產(chǎn)生的不同 mRNA剪接變異體(variants)的過程。研1究證實(shí)選擇性剪接的存在與細(xì)胞的正常生理、發(fā)育調(diào)控以及疾病都有著密切的關(guān)聯(lián)。TCF4(又名TCF7L2)屬于TCF/LEF蛋白家族，在正常組織發(fā)育和分化過程中，接受β-catenin的信號，啟動下游信號通路，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖與分化。TCF是經(jīng)典的Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控的關(guān)

2、鍵的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，研究TCF4的選擇性剪接具有重要的實(shí)際意義。
　　本課題設(shè)計思路為從證實(shí)食管癌中TCF4N剪接異構(gòu)體的存在出發(fā)，并初步探討其初步功能。本課題中采用RT-PCR方法擴(kuò)增，并PCR產(chǎn)物測序鑒定?？寺CF4N剪接異構(gòu)體并構(gòu)建真核表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)染EC109細(xì)胞高效表達(dá)，檢測其對細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在食管癌細(xì)胞株中，TCF4N剪接異構(gòu)體被證實(shí)存在。對比食管癌組織與癌旁組織發(fā)現(xiàn)TCF4N異構(gòu)體在癌組

3、織中表達(dá)顯著降低(p<0.05)。成功構(gòu)建了TCF4N表達(dá)載體，在EC109細(xì)胞中獲得高效表達(dá)。功能分析顯示：增強(qiáng)TCF4N表達(dá)可抑制EC109細(xì)胞的增殖，影響細(xì)胞周期的分布，并抑制TCF4的轉(zhuǎn)錄活性。本課題得出結(jié)論認(rèn)為，在人食管癌中具有抑制功能的TCF4N剪接異構(gòu)體是真實(shí)存在，與食管癌的發(fā)生有一定關(guān)聯(lián)。TCF4作為核內(nèi)轉(zhuǎn)錄輔助因子，其本身不能決定基因表達(dá)的開啟或者抑制。與之結(jié)合的其它轉(zhuǎn)錄激活蛋白決定了它所調(diào)節(jié)的靶基因的表達(dá)狀態(tài)。在 W