定向合成GAMG的菌株篩選及其催化特性研究.pdf

1、以定向生物合成β-D-單葡萄糖醛酸基甘草次酸(Glycyrrhetinicacidmonoglucuronide,GAMG)為目的，從新疆主要甘草種植區(qū)分離到可以利用甘草酸為唯一碳源進行生長的微生物65株，從中篩選到一株青霉屬真菌Penicilliumsp.Li-3，經(jīng)甘草酸誘導后，所表達的β-D-葡萄糖醛酸苷酶具有較高的反應特異性，并屬于胞內(nèi)酶，能定向水解甘草酸生成GAMG，其摩爾轉(zhuǎn)化率可達到88.45％。對Penicilliumsp

2、.Li-3菌株的產(chǎn)酶特性研究表明，該菌株細胞生長與產(chǎn)酶過程為非偶聯(lián)型；菌株在表達β-D-葡萄糖醛酸苷酶時存在著碳代謝阻遏現(xiàn)象，甘草酸是最佳碳源及誘導劑；最佳氮源為硝酸銨；在接種量10％、培養(yǎng)基初始pH5.0、培養(yǎng)溫度32℃、添加0.12％的Tween80及培養(yǎng)36小時后補加0.04％的甘草酸能顯著提高酶活，培養(yǎng)72小時為最佳產(chǎn)酶時間。在上述條件下，最高酶活可達176.64U·mL-1。 以Penicilliumsp.Li-3菌株

3、的β-D-葡萄糖醛酸苷酶作為催化劑，研究了其催化反應動力學，結(jié)果表明：催化甘草酸的活化能Ea為116.072kJ·mol-1，反應動力學常數(shù)Km為0.328μmol·L-1，最大反應速度Vmax為3.53×10-3mmol·L-1·min-1，催化體系的最適反應溫度為50℃，最適反應pH范圍為3.8～4.6。該酶在45℃以下較穩(wěn)定，pH穩(wěn)定性維持在4.2～6.6之間，Mg2+對催化活力有一定促進作用，而Cu2+、Fe2+、Fe3+、Ag