產(chǎn)偏酸性蛋白酶菌株的篩選及其酶應(yīng)用特性的研究.pdf

1、酸性蛋白酶是一種能在酸性環(huán)境下水解蛋白質(zhì)的酶類，其最適作用pH值為2.5-5.0。由于酸性蛋白酶具有較好的耐酸性，因此被廣泛地應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、輕工、皮革工藝以及飼料加工工業(yè)中。 目前用于工業(yè)化生產(chǎn)的酸性蛋白酶大多為霉菌酸性蛋白酶，此類酶的最適作用pH值為3.0左右，當(dāng)pH值升高時(shí)，酸性蛋白酶的酶活會(huì)明顯降低，且此類酶不耐熱，當(dāng)溫度達(dá)到50℃以上時(shí)很不穩(wěn)定，從而限制了酸性蛋白酶的應(yīng)用范圍。 因此，本研究以開發(fā)耐溫偏酸性蛋

2、白酶為目標(biāo)，進(jìn)行了以下幾方面的研究： (1)偏酸性蛋白酶產(chǎn)生菌的分離篩選。 (2)偏酸性蛋白酶粗酶酶學(xué)性質(zhì)的研究。 (3)偏酸性蛋白酶固體發(fā)酵條件的優(yōu)化。 (4)偏酸性蛋白酶產(chǎn)生菌P-1007的初步鑒定。 (5)偏酸性蛋白酶在啤酒澄清中的應(yīng)用。 本論文主要研究結(jié)果和結(jié)論如下： (1)用常規(guī)土壤分離方法，從土壤樣品中篩選到一株產(chǎn)偏酸性蛋白酶的菌株，命名為P-1007。 (2)

3、通過單因素發(fā)酵條件實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)的方法得到最佳固體發(fā)酵條件為：麥麩15g，黃豆粉8％，葡萄糖3％，NaH2PO41％，CuSO40.2％，水35ml，最佳起始pH7.0，最適發(fā)酵溫度為40℃。在此條件下所產(chǎn)酶活可達(dá)3700u/g，比原始菌株發(fā)酵酶活提高了將近2倍，且產(chǎn)酶穩(wěn)定性較好。 (3)菌株P(guān)-1007所產(chǎn)的偏酸性蛋白酶的最適作用pH值為5.5，最適作用溫度為50℃。酶的pH穩(wěn)定性和耐溫性較好，50℃、pH5.5條件下保溫8h

4、后剩余酶活可達(dá)83％以上，pH5.5、50℃條件下保溫2h后剩余酶活仍在70％以上。Mn2+、Cu2+對偏酸性蛋白酶有明顯的激活作用，其它金屬離子則對該酶有不同程度的抑制作用。與目前所得到的酸性蛋白酶相比較，偏酸性蛋白酶具有較高的作用pH值和較好的耐溫性。 (3)從菌株P(guān)-1007菌落形態(tài)、顯微觀察以及5.8SrDNA-ITS區(qū)序列分析可以看出菌株P(guān)-1007可能屬于煙曲霉。 (4)從酶學(xué)性質(zhì)上可以看出，菌株P(guān)-1007

5、所產(chǎn)的偏酸性蛋白酶的作用條件滿足于啤酒澄清工藝的要求，因此本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了偏酸性蛋白酶在啤酒澄清中的應(yīng)用研究以及該酶與釀造復(fù)合酶和啤酒用中性蛋白酶作用效果的比較。研究結(jié)果表明：經(jīng)偏酸性蛋白酶作用后，麥汁和發(fā)酵液中酪氨酸含量、透光率、總氮量、可凝固性氮含量都有了明顯的提高。麥汁中a-氨基氮含量也增加了，說明偏酸性蛋白酶將凝固性蛋白質(zhì)水解成了分子量較小的a-氨基氮，為啤酒酵母的生長繁殖提供了氮源。同時(shí)發(fā)酵液中的a-氨基氮含量卻降低了，分析原因?yàn)?/p>