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文檔簡(jiǎn)介
1、【目的】
隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,鋁的生物毒性作用逐漸被發(fā)現(xiàn)并受到普遍關(guān)注。鋁在自然界普遍存在,人們?cè)谌粘I钪袝?huì)攝入大量的鋁,并在體內(nèi)蓄積產(chǎn)生多種毒性作用。目前其神經(jīng)系統(tǒng)毒性已受到廣泛關(guān)注,很多研究發(fā)現(xiàn)鋁可引起多種神經(jīng)退行性疾病,如老年性癡呆、透析性腦病等。另外鋁還可以妨礙正常的鈣、磷代謝,抑制機(jī)體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng),引起骨組織損害、生殖功能降低、貧血以及其他疾病。鋁引起機(jī)體生殖功能障礙的機(jī)制主要有抑制抗氧化系統(tǒng)作用,改變酶的活
2、力,影響遺傳物質(zhì)合成等。對(duì)于金屬負(fù)荷過多引起的疾病,一般傾向于采用其螯合劑來治療。人們?cè)?jīng)嘗試過多種螯合劑用于鋁的排出,結(jié)果均不太理想。本研究把DFP(1,2-"甲基-3-羥基-4-吡啶酮,去鐵酮)作為一種鋁的新型螯合劑,以Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,將其生殖系統(tǒng)作為靶器官,研究DFP對(duì)鋁負(fù)荷過多引起的生殖損傷的保護(hù)作用,探討其作用機(jī)理,為開發(fā)一種新的臨床應(yīng)用排鋁藥物提供依據(jù)。
【方法】
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
3、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康雄性Wistar大鼠35只,體重180g~220g,自由飲水及進(jìn)食。動(dòng)物按照體重隨機(jī)分成5組:陰性對(duì)照組、鋁對(duì)照組、DFP低劑量組、DFP中劑量組和DFP高劑量組。大鼠以灌胃方式給藥,每周連續(xù)給藥五天,間隔兩天后繼續(xù)給藥,制造鋁慢性中毒模型。陰性對(duì)照組每同給予lml生理鹽水,其余各組均以劑量為172.5mg/(kg.d)的氯化鋁溶液灌胃,染毒時(shí)程為8周。造模成功后,DFP各組給予不同劑量的DFP解毒,陰性對(duì)照組及鋁對(duì)
4、照組以lml生理鹽水代替。解毒2周后,大鼠禁食24小時(shí),內(nèi)眥取血,處死,解剖出睪丸附睪等,冰箱內(nèi)冷藏備用。
2.大鼠一般情況及臟器系數(shù)
大鼠每日觀察一般情況及稱重,并根據(jù)體重給予相應(yīng)劑量灌胃。記錄大鼠每日體重,繪制體重變化曲線,比較變化是否有差異。大鼠處死后,解剖出睪丸、附睪,稱重并計(jì)算臟器系數(shù),各組織供其他實(shí)驗(yàn)使用。
3.DFP排鋁效果及對(duì)必需元素的影響
稱取各組大鼠睪丸組織,用
5、微波消解儀進(jìn)行消化。采用石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定鋁元素,火焰原子吸收光譜法測(cè)定銅、鋅、鈣、鐵和鎂元素。觀察DFP排鋁效果和對(duì)睪丸組織中必需元素的影響。
4.DFP對(duì)鋁染毒大鼠睪丸組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
稱取大鼠睪丸組織制成勻漿。測(cè)定其中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,研究DFP對(duì)鋁負(fù)荷導(dǎo)致睪丸中抗氧化系統(tǒng)損傷的恢復(fù)作用。
5.DFP對(duì)鋁染毒大鼠睪丸標(biāo)志酶的影響
6、稱取大鼠睪丸組織制成勻漿。測(cè)定其中睪丸標(biāo)志酶乳酸脫氫酶(LDH)和B-葡糖苷酸酶(B-G)的活力,研究DFP對(duì)鋁染毒所致睪丸標(biāo)志酶活性降低的恢復(fù)作用。
6.DFP對(duì)鋁染毒大鼠遺傳物質(zhì)的影響
大鼠最后一次灌胃后禁食24小時(shí),內(nèi)眥取血作外周血嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核試驗(yàn),觀察DFP對(duì)鋁染毒所致細(xì)胞遺傳毒性的恢復(fù)作用,推斷DFP對(duì)于鋁損傷生殖細(xì)胞的影響。
7.DFP對(duì)鋁染毒大鼠精子形態(tài)的影響
7、 大鼠附睪在生理鹽水中剪碎,過濾后在玻片上涂布,伊紅染液染色制作附睪精子涂片,光鏡下觀察精子形態(tài),計(jì)數(shù)畸變數(shù)目,計(jì)算畸形率,研究DFP對(duì)于鋁染毒導(dǎo)致精子畸形的恢復(fù)作用。
8.DFP對(duì)鋁染毒導(dǎo)致大鼠睪丸組織損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察
取大鼠睪丸組織固定、制作石蠟切片,蘇木素-伊紅(HE)染色,顯微鏡下進(jìn)行病理學(xué)觀察,研究DFP對(duì)于鋁染毒大鼠睪丸組織損傷的恢復(fù)作用。
【結(jié)果】
1.DF
8、P對(duì)大鼠一般情況的影響
各組大鼠一般情況良好,體重變化趨勢(shì)無顯著差異,睪丸、附睪重量及臟器系數(shù)各組間比較均未見顯著差異。
2.DFP排鋁效果及對(duì)必需元素的影響
鋁對(duì)照組大鼠睪丸中的鋁含量明顯高于陰性對(duì)照組(P<0.01): DFP各組鋁含量均低于鋁對(duì)照組(P<0.01)。Fe、Zn、Ca、Mg、Cu元素在各組之間比較均沒有顯著差異。
3.DFP對(duì)鋁染毒大鼠睪丸組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
9、 10、差異。 11、DFP對(duì)鋁染毒大鼠遺傳物質(zhì)的影響 12、反應(yīng)關(guān)系,其中DFP中、高劑量組與鋁對(duì)照組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 13、含量,而對(duì)于機(jī)體必需微量元素代謝基本不產(chǎn)生影響。
鋁對(duì)照組大鼠睪丸組織中SOD活性低于陰性對(duì)照組(P
4.DFP對(duì)鋁染毒大鼠睪丸標(biāo)志酶的影響
鋁對(duì)照組大鼠睪丸組織中β-G活力低于陰性對(duì)照組(P<0.05);DFP各組β-G活力較鋁對(duì)照組升高,且呈一定的劑量反應(yīng)關(guān)系,高劑量組與鋁對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DFP各組β-G活性與陰性對(duì)照組無明顯差異。鋁對(duì)照組LDH活性低于陰性對(duì)照組(P
鋁對(duì)照組和DFP各劑量組大鼠外周血嗜多染紅細(xì)胞微核率均高于陰性對(duì)照組(P<0.05);DFP中、高劑量組微核率低于鋁對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);DFP低劑量組與鋁對(duì)照組比較無顯著差異。
6.DFP對(duì)鋁染毒大鼠精子形態(tài)的影響
鋁對(duì)照組大鼠精子畸形率高于陰性對(duì)照組(P
7.DFP對(duì)鋁染毒導(dǎo)致大鼠睪丸組織損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察
相對(duì)于陰性對(duì)照組,鋁對(duì)照組大鼠睪丸組織鏡下發(fā)現(xiàn),精曲小管明顯萎縮,管壁變薄,細(xì)胞層數(shù)明顯減少,精細(xì)胞減少,結(jié)構(gòu)不清,部分管壁細(xì)胞脫落形成空洞。DFP各組有不同程度的恢復(fù)。
【結(jié)論】
l.DFP可以明顯促進(jìn)大鼠睪丸組織中鋁的排出,降低組織內(nèi)鋁的
2.DFP能夠減少鋁染毒大鼠睪丸組織脂質(zhì)過氧化的發(fā)生,維持正常生理功能。
3.DFP能夠恢復(fù)鋁染毒導(dǎo)致的大鼠部分睪丸標(biāo)志酶的活性損傷,改善生殖功能。
4.DFP能夠降低鋁染毒導(dǎo)致的大鼠紅細(xì)胞微核率上升,精子畸形增多,對(duì)鋁導(dǎo)致遺傳物質(zhì)的損傷有一定的改善作用。
5.對(duì)睪丸組織進(jìn)行病理學(xué)觀察,鏡下可見DFP能夠?qū)τ阡X染毒引起的大鼠睪丸組織
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