高氧肺損傷新生大鼠肺組織中肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白-A(SP-A)的mRNA和蛋白表達及布地奈德的干預作用.pdf

1、目的：
　　1．建立新生大鼠高氧肺損傷的動物模型；
　　2．觀察與比較高氧性損傷時新生大鼠肺組織的病理組織學改變，以及肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白-A（pulmonary surfactant protein-A，SP-A）的mRNA及其蛋白的表達變化，從而探討SP-A在新生大鼠高氧肺損傷發(fā)生、發(fā)展中可能的作用；
　　3．探討吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德（budesonide，BUD）是否通過調(diào)控SP-A的表達從而發(fā)揮對高氧肺損

2、傷的保護作用，為臨床防治高氧肺損傷提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　取108只出生1天內(nèi)的新生Sprague Dawley（SD）大鼠（雌雄不限）隨機分成三組：即Ⅰ組：空氣組（對照組），Ⅱ組：高氧＋生理鹽水組（高氧組），Ⅲ組：高氧＋布地奈德組（干預組），每組36只。
　　Ⅰ組置于空氣中；將Ⅱ、Ⅲ組實驗動物持續(xù)暴露于90％～95％氧箱中，直至實驗結(jié)束。Ⅱ組于每日霧化吸入NS10ml，Ⅲ組每日同一時間點吸入溶解BUD的等量的

3、NS(含BUD2mg)。
　　設(shè)立實驗后3、7和14天3個時間觀測點，處死動物，行支氣管肺泡灌洗，測定灌洗液中蛋白含量；取肺組織，計算肺濕/干重比；HE染色觀察組織病理學變化；Westen Blot方法檢測SP-A蛋白含量、RT-PCR方法檢測SP-A mRNA表達水平。
　　結(jié)果：
　　1．各組實驗動物一般情況：Ⅰ組（空氣組）中的實驗動物在實驗期間精神狀態(tài)佳、活動靈活，進食正常。Ⅱ組（高氧組）中的實驗動物逐漸出現(xiàn)癥狀

4、，表現(xiàn)皮毛無光澤、精神萎靡、活動少,脫氧后煩躁不安,呼吸困難明顯,鼻尖發(fā)紺,恢復供氧可逐漸緩解；Ⅲ組（干預組）中的實驗動物情況介于前兩者之間。
　　2．肺組織病理切片：Ⅰ組（空氣組）實驗動物肺組織病理切片見肺組織結(jié)構(gòu)規(guī)整，無炎癥反應(yīng)，肺泡大小、形態(tài)均一；Ⅱ組（高氧組）高氧暴露3d后可見肺血管擴張充血，肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)紅細胞及炎性細胞，肺間隔斷裂，肺泡腔擴大；高氧7天時，炎性滲出、肺水腫、肺出血較前更加明顯，部分肺間隔增寬變形，肺組織結(jié)

5、構(gòu)紊亂；14天時更為明顯，肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，肺間隔重度增厚，出現(xiàn)明顯纖維化改變，肺泡發(fā)育受阻，肺泡數(shù)量明顯減少、大小不一，肺泡腔明顯增大,部分肺泡融合，可見肺大泡或肺不張。Ⅲ組（干預組）肺組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)改變較II組有明顯減輕。
　　3.肺組織濕/干重比值（W/D）：實驗3天、7天時，Ⅱ組（高氧組）實驗動物肺組織濕/干重比值（W/D）較Ⅰ組（空氣組）增高（P<0.01），實驗14天時，Ⅱ組較Ⅰ組升高更明顯（P<0.01），而Ⅲ組（干預

6、組）與Ⅱ組相比，3天、7天、14天的比值均有明顯下降（P<0.01）。
　　4.支氣管肺泡灌洗液（BLAF）中蛋白含量（TP）測定：實驗3天、7天和14天時Ⅱ組（高氧組）BLAF中TP均高于Ⅰ組（空氣組），差異有顯著性意義（P<0.01）；Ⅲ組3天時BLAF中TP較II組降低（P<0.05），7天、14天時明顯降低（P<0.01）。
　　5.肺組織中SP-A蛋白表達水平的變化：Westen Blot檢查測定結(jié)果表明：與I組動

7、物比較，II組（高氧組）實驗3天時SP-A蛋白表達明顯增高（P<0.01）；7天、14天SP-A蛋白表達下降，14天時下降更明顯（P<0.01）。Ⅲ組（干預組）實驗3天時SP-A蛋白表達介于I組與II組之間（P<0.05），7天、14天SP-A蛋白的表達均較高氧組組顯著升高(P<0.05)。
　　6.肺組織中SP-A mRNA表達水平的變化：RT-PCR檢查測定結(jié)果表明：與I組動物比較，II組實驗3天時SP-A mRNA表達水平明

8、顯增高，差異有顯著性意義(P<0.05)；7天時可見表達下降，14天時下降更明顯(P<0.01)。III組的SP-A mRNA表達水平接近于I組SP-A mRNA的表達趨勢；實驗3天時SP-A mRNA表達水平介于I組與II組之間，與II組比較有顯著性意義(P<0.05)；7天、14天時表達水平較II組顯著升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.高氧對新生大鼠肺組織有損傷作用，并隨吸氧時間的延長而加重。主要病理變化為肺組

9、織局部水腫和出血、炎癥滲出、結(jié)構(gòu)組織紊亂、肺泡發(fā)育障礙、肺泡數(shù)目減少和肺間質(zhì)纖維化。
　　2.高氧性肺損傷時，SP-A的mRNA和蛋白在肺組織中的表達規(guī)律呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢，隨著高氧暴露時間的延長與肺損傷程度相平行，提示高氧肺損傷發(fā)生過程中機體具有一定的自我保護機制，而肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白分泌減少或功能缺陷，是高氧肺損傷的重要因素。
　　3.吸入糖皮質(zhì)激素布地奈德可能通過抗氧化、減輕炎癥反應(yīng)，進而上調(diào)SP-A的mRNA