新生大鼠高氧性肺損傷肺組織中Smad3及PPAR-γ的蛋白和mRNA表達及羅格列酮的干預(yù)作用.pdf

1、目的:選擇新生大鼠建立急性高氧性的肺損傷模型并使用羅格列酮進行干預(yù)且和正常新生大鼠進行對比：1.觀察與比較各實驗組動物其一般情況以及肺組織的病理改變；2.探究各實驗組的肺組織內(nèi)Smad3及PPAR-γ表達的變化，從而探討Smad3及PPAR-γ于急性高氧性的肺損傷其發(fā)病機制中的作用；3.探討羅格列酮是否發(fā)揮對急性高氧性的肺損傷起到的保護作用，對臨床防治新生兒高氧性肺損傷來說可以提供理論依據(jù)。
　　方法：將108只出生滿48小時的新

2、生SD大鼠（雌雄均可），按照隨機原則分為三組：I組--空氣組；II組--高氧組（高氧+生理鹽水）；III組--羅格列酮干預(yù)組（高氧+羅格列酮）；
　　I組新生大鼠置于常壓空氣中飼養(yǎng)。II組、III組新生大鼠置于氧濃度維持在90-95％的氧箱中飼養(yǎng)。III組于實驗第一天起每日灌喂羅格列酮(3mg/kg)。I組與II組于實驗第一天起每日灌喂等量生理鹽水。
　　每組按實驗時間點分為1天、3天、7天三個亞組，每組于各實驗時間點分別隨

3、機選取12只實驗鼠，處死后取材并完成下述指標的檢測：
　?。?）肺泡灌洗液中的總蛋白含量；
　?。?）選取左肺并稱其濕重和干重，算出肺濕/干重比；
　?。?）觀察肺組織病理學(xué)情況：選取右上肺對其進行病理切片以觀察肺組織的病理改變；
　?。?）肺組織Smad3及PPAR-γ蛋白及mRNA的含量測定：選取肺組織勻漿并提取蛋白，采用western blotting法對其蛋白含量分別加以測定；另選取取部分肺組織進行RNA

4、提取，采用RT-PCR法對其mRNA含量分別進行測定。
　　結(jié)果：1.各組實驗動物一般情況觀察：I組中的實驗動物精神狀態(tài)佳，皮毛光澤正常，飲食正常，活動靈活，無死亡。II組中的實驗動物高氧暴露1天時精神狀態(tài)好，皮毛光澤可，進食可，離氧后無呼吸困難表現(xiàn)。高氧暴露三天后實驗動物精神尚可，皮毛光澤較前變差，進食較差，脫離氧氣后呼吸頻率加快。高氧暴露七天時實驗動物精神萎靡，皮毛光澤差，少吃少動，離氧后出現(xiàn)呼吸急促，個別死亡。III組的實驗

5、動物一般情況較II組有改善。
　　2.肺組織病理學(xué)改變：I組大鼠各時相肺組織結(jié)構(gòu)規(guī)整，肺泡大小均一、肺泡腔內(nèi)無炎癥反應(yīng)。II組實驗動物于高氧暴露1天時可見肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)可見少許紅細胞，無明顯滲出；3天后可見肺血管擴張充血，肺泡內(nèi)可見紅細胞、炎癥細胞浸潤，肺間質(zhì)水腫，肺間隔斷裂，肺泡腔擴大；7天時則肺組織出現(xiàn)明顯液體滲出及炎癥細胞浸潤，肺泡內(nèi)出血，肺間質(zhì)水腫明顯加重，部分肺間隔增寬變形，結(jié)構(gòu)紊亂。III組的肺組織病理改變，肺泡

6、腔內(nèi)液體滲出，紅細胞、炎性細胞浸潤較II組明顯減輕。
　　3.肺組織濕/干重比（W/D）：實驗1天時，各組實驗動物的肺組織W/D無明顯差異（P＞0.05）。實驗3天、7天時，II組實驗動物的肺組織W/D較Ⅰ組有升高（P＜0.01），III組實驗動物的肺組織W/D較II組有降低（P＜0.01）。
　　4.支氣管肺泡灌洗液（BLAF）中總蛋白（TP）含量測定：實驗1天時，三組實驗動物BLAF中TP含量無明顯差異（P＞0.05）。

7、而實驗3天及7天時，II組實驗動物的BLAF中TP含量明顯高于Ⅰ組(P＜0.01)，而III組的BLAF中TP含量則明顯低于II組(P＜0.01)。
　　5.肺組織中Smad3及PPAR-γ蛋白表達水平的變化：western blotting檢測結(jié)果表明：各組實驗動物肺組織中的Smad3、PPAR-γ的蛋白表達水平在實驗第1天無顯著差異（P＞0.05）。實驗第3天及第7天時，II組Smad3的蛋白表達水平較I組有明顯升高（P＜0.

8、01），II組PPAR-γ的蛋白表達水平較I組有明顯下降（P＜0.01）。III組肺組織中的PPAR-γ的蛋白表達明顯高于II組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　6.肺組織中 Smad3及 PPAR-γ的mRNA表達水平的變化：在本實驗中，通過RT-PCR方法檢測顯示：各組實驗動物肺組織中的Smad3、PPAR-γ的mRNA表達水平在實驗第1天無顯著差異（P＞0.05）。實驗第3天及第7天時，II組Smad3的mRNA表

9、達水平較I組有明顯升高（P＜0.01），II組PPAR-γ的mRNA表達水平較I組有明顯下降（P＜0.01）。III組肺組織中的PPAR-γ的mRNA表達水平明顯高于II組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：（1）暴露于高濃度氧氣中一定時間對新生大鼠肺組織有損傷作用，主要的病理表現(xiàn)為肺組織局部充血水腫、炎癥滲出、肺組織結(jié)構(gòu)紊亂、肺泡數(shù)目減少、呼吸功能受損、氧依賴性增強。
　?。?）急性高氧性的肺損傷新生大鼠模型