CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α在高氧肺損傷新生大鼠肺組織中的動態(tài)表達(dá)及其意義.pdf

1、研究目的:通過建立新生大鼠高氧肺損傷模型并分析測定不同時期肺損傷的肺組織中CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBPα)基因及其蛋白產(chǎn)物表達(dá)水平的變化,從而探討C/EBPα在新生大鼠高氧性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的地位及作用,為今后的臨床預(yù)防和治療提供新的作用靶點(diǎn)。
　　 研究方法:
　　 選取80只出生6小時內(nèi)的清潔級Sprague-Dawley(S-D)新生大鼠(簡稱新生大鼠)作為研究對象,按實(shí)驗(yàn)設(shè)計采用以下研究方法:
　　

2、 1.實(shí)驗(yàn)分組:將上述新生大鼠根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件隨機(jī)分為2組:Ⅰ、空氣對照組,Ⅱ、高氧暴露組,每組40只。Ⅰ組置于正?？諝猸h(huán)境中與母鼠共同喂養(yǎng),Ⅱ組置于專用高氧箱中喂養(yǎng)；
　　 2.高氧肺損傷模型的建立:高氧暴露組新生大鼠置90-95％氧濃度環(huán)境的高氧箱中喂養(yǎng),按照高氧暴露后12h末、1d、3d、7d、14d,5個時間點(diǎn)分5個亞組,每個亞組8只,各時間點(diǎn)處死動物；
　　 3.組織學(xué)觀測:取左肺予常規(guī)組織學(xué)方法制作標(biāo)本切片,H

3、E染色后鏡下觀察肺臟形態(tài)結(jié)構(gòu)變化并檢測肺組織輻射狀肺泡計數(shù)(RAC),并與對照組大鼠比較；
　　 4.糖原染色:取標(biāo)本切片以過碘酸雪夫氏染色法(PAS染色法)處理,鏡下觀測并評估組織中糖原含量,并與對照組比較；
　　 5.C/EBPαmRNA的表達(dá)及其蛋白產(chǎn)物的檢測:取右肺標(biāo)本制肺組織均漿,RT-PCR測定肺組織均漿中C/EBPαmRNA的變化；免疫組織化學(xué)結(jié)合顯微圖像分析檢測C/EBPα基因蛋白的表達(dá),并分別與對照組比

4、較。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.高氧性肺損傷組織學(xué)變化:與空氣對照組相比,實(shí)驗(yàn)組新生大鼠高氧暴露12h,1天后肺組織結(jié)構(gòu)未見明顯變化,3天后見肺毛細(xì)血管擴(kuò)張、肺泡充血及少量出血、炎性細(xì)胞浸潤等病理變化；7d后肺損傷表現(xiàn)進(jìn)一步加重,表現(xiàn)為大面積肺組織出血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤明顯；14天肺泡腔炎性滲出不明顯,肺泡數(shù)量減少,肺間隔明顯增厚,肺間質(zhì)細(xì)胞增加,肺組織結(jié)構(gòu)紊亂,形成結(jié)構(gòu)簡單的肺泡；
　　 2.肺組織輻射狀肺

5、泡計數(shù)(RAC):與空氣組新生大鼠比較,高氧暴露后3d內(nèi)RAC雖有減少但無顯著性差異(P>0.05)；此后隨著日齡兩組間RAC差異逐漸增大,至高氧暴露7d后,實(shí)驗(yàn)組新生大鼠RAC計數(shù)明顯低于相應(yīng)空氣組,差異有顯著性意義(P<0.05),14d高氧組與相應(yīng)空氣組RAC比較減少更為明顯,兩者間差異有高度顯著性意義(P<0.01)；
　　 3.肺組織中糖原含量的比較:與空氣組新生大鼠比較,高氧暴露12小時及1天時糖原含量有所下降,但兩

6、組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),3天及7天后肺組織上皮細(xì)胞中糖原含量下降明顯,兩組間差異有顯著性意義(P<0.05,P<0.01),而高氧暴露14天后糖原含量明顯增加,兩組比較差異有顯著性意義(P<0.01)；
　　 4.mRNA及蛋白產(chǎn)物的表達(dá):RT-PCR.及免疫組織化學(xué)檢測檢測結(jié)果均表明:空氣對照組新生大鼠肺組織中C/EBPα的表達(dá)在生后12小時達(dá)峰值,此后隨著時間的推移,C/EBPα的表達(dá)逐漸下降。高氧組新生大鼠

7、肺組織中C/EBPα表達(dá)情況則呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,即在出生后12小時比空氣組表達(dá)水平略高,但兩組間無顯著性差異(P>0.05)；1天后兩者間差異進(jìn)一步加大且有顯著性意義(P<0.05),至實(shí)驗(yàn)3天后高氧組新生大鼠肺組織中C/EBPα的表達(dá)達(dá)到高峰,較空氣組明顯升高,差異有高度顯著性意義(P<0.01)；隨后開始下降,第7天時與空氣組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),第14天時,較空氣組明顯下降,兩組間差異有顯著性意義(P<0.0

8、1)；
　　 結(jié)論:
　　 1.本實(shí)驗(yàn)成功建立了新生大鼠高氧肺損傷的病理模型,隨著高氧暴露時間的延長,肺組織的損傷程度進(jìn)行性加重,至高氧暴露14天時,出現(xiàn)了類似于支氣管肺發(fā)育不良的表現(xiàn)；
　　 2.C/EBPα主要表達(dá)于肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞及終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞中,在正常對照組生后C/EBPα表達(dá)呈現(xiàn)逐漸遞減的趨勢,提示生后C/EBPα的調(diào)控可能與正常肺發(fā)育關(guān)系密切；
　　 3.C/EBPαmRNA及蛋白表達(dá)

9、在高氧肺損傷的早期有高表達(dá),晚期表達(dá)下降,表明轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα可能參與高氧肺損傷應(yīng)激初期肺組織的保護(hù)性調(diào)節(jié)機(jī)制,但隨著損傷程度的加重,這種保護(hù)性機(jī)制將出現(xiàn)失衡,晚期表達(dá)下降可能是導(dǎo)致肺泡發(fā)育受阻,成熟障礙的重要因素；
　　 4.隨著高氧暴露時間的延長,肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)的糖原含量呈現(xiàn)先減少后增多的趨勢,其糖原含量減少可能與C/EBPα的保護(hù)性調(diào)節(jié)機(jī)制及肺損傷時糖原過度消耗有關(guān),后期糖原含量明顯增加則提示高氧肺損傷晚期存在肺泡Ⅱ型