白花蛇舌草復(fù)方提取物抗癌作用的分子機(jī)理研究.pdf

1、本實驗通過研究白花蛇舌草復(fù)方提取物對腫瘤細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑的影響來闡明白花蛇舌草復(fù)方提取物對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用的分子機(jī)理。
　　 首先用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT）測定白花蛇舌草復(fù)方提取物對體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞SGC7901增殖的抑制作用；然后用Western blot分析了白花蛇舌草復(fù)方提取物對PI3K介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路中P-AKT、HIF-1α以及P-MAPK的影響；再用RT-PCR方法檢測了HIF-1α下游信號

2、分子VEGF的基因表達(dá)水平；最后通過報告基因檢測了白花蛇舌草復(fù)方提取物對VEGF基因表達(dá)的影響。
　　 MTT檢測結(jié)果表明，自花蛇舌草復(fù)方提取物在低濃度時（≤0.2mg/ml）對胃癌SGC7901細(xì)胞有增殖作用，這可能是細(xì)胞應(yīng)激作用，而在高濃度時（≥1.0mg/ml）則對胃癌SGC7901細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用。Western blot檢測結(jié)果表明，胃癌SGC7901細(xì)胞和前列腺癌DU145細(xì)胞經(jīng)過自花蛇舌革復(fù)方提取物處理

3、后，HIF～1α水平顯著降低，且表現(xiàn)出濃度和時間依賴性，而P-AKT和P-MAPK水平均沒有明顯變化。這一結(jié)果表明，白花蛇舌草復(fù)方提取物中含有信號傳導(dǎo)通路抑制劑，但該提取物對信號傳導(dǎo)通路的抑制作用可能不是通過P-AKT或者P-MAPK而是通過別的信號傳導(dǎo)途徑來影響HIF-1α的表達(dá)水平，也有可能是直接抑制HIF-1α的表達(dá)。RT-PCR檢測結(jié)果表明，胃癌SGC7901細(xì)胞、前列腺癌DU145細(xì)胞在經(jīng)過白花蛇舌草復(fù)方提取物處理后，VEGF

4、基因表達(dá)水平顯著降低，且表現(xiàn)濃度依賴性。報告基因檢測結(jié)果表明，胃癌SGC7901細(xì)胞、前列腺癌DU145細(xì)胞、小鼠上皮JB6細(xì)胞在經(jīng)過白花蛇舌草復(fù)方提取物處理后，VEGF基因表達(dá)水平顯著降低，且表現(xiàn)濃度依賴性。RT-PCR和報告基因檢測結(jié)果表明白花蛇舌草復(fù)方提取物對腫瘤細(xì)胞VEGF的表達(dá)水平有下調(diào)作用，其作用機(jī)理可能是直接影響VEGF的表達(dá)水平或通過下調(diào)HIF-1α的表達(dá)水平來間接影響VEGF的表達(dá)水平。
　　 綜上所述，細(xì)胞在

5、經(jīng)過白花蛇舌草復(fù)方提取物處理后，HIF-1α的表達(dá)水平和下游信號分子VEGF的基因表達(dá)水平都出現(xiàn)顯著下調(diào)，但P-AKT和P-MAPK水平均沒有明顯變化。這表明，白花蛇舌草復(fù)方提取物中含有信號傳導(dǎo)通路抑制劑，而且，該提取物對信號傳導(dǎo)通路的抑制作用可能是通過別的信號傳導(dǎo)途徑或直接作用于HIF-1α基因來影響HIF-1α的表達(dá)水平并進(jìn)而影響其下游信號分子VEGF基因的表達(dá)水平。雖然具體的信號傳導(dǎo)途徑還有待于進(jìn)一步的研究，但是白花蛇舌草復(fù)方提取