2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、蛋白酪氨酸激酶能催化ATP上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到其它重要蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上,使其發(fā)生磷酸化。在細(xì)胞內(nèi)參與信號(hào)傳導(dǎo),與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、死亡等一系列生理生化過(guò)程密切相關(guān)<'[3,4]>。有資料表明蛋白酪氨酸激酶的異常與腫瘤相關(guān)。如本文使用的靶蛋白v-Src蛋白具有極強(qiáng)的轉(zhuǎn)化效應(yīng),并能誘導(dǎo)細(xì)胞遷移;c-Src蛋白時(shí)空上表達(dá)的紊亂及引起的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常被認(rèn)為是結(jié)腸癌、乳腺癌、成纖維細(xì)胞瘤等發(fā)生、發(fā)展的原因之一<'[5,6]>。目前,以蛋白酪氨酸激酶

2、為靶點(diǎn)的藥物研發(fā)是抗腫瘤藥物研究的一個(gè)熱點(diǎn)方向。已有十多種蛋白酪氨酸激酶抑制劑和抗體進(jìn)入I-Ⅲ期臨床試驗(yàn)階段,個(gè)別的已經(jīng)上市,如以:Bcr-Abl/PDGFR為靶點(diǎn)的Gleevec(STI571)、以EGFR為靶點(diǎn)的Iressa(ZD1839)和Eflotinib(OSI-774)。 本文在體外以Src蛋白為靶位點(diǎn),從抗癌中草藥白花蛇舌草(HedyotidisDiffusae)中篩選得到兩種具有蛋白酪氨酸激酶抑制活性的葸醌類(lèi)化合

3、物。首先,利用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建成功的含v-Src目的基因片斷的工程菌株E.coli.BL21(DE3)laGEX-KT/v-src,經(jīng)菌株鑒定、表達(dá)條件優(yōu)化等工作,用IPTG誘導(dǎo)大量表達(dá)GST-v-Src蛋白,收集包涵體蛋白,并經(jīng)變性復(fù)性處理,獲得具有酪氨酸激酶活性的融合蛋白。其次,建立以生物素化的聚Glu:Tyr(4:1)為激酶反應(yīng)底物、利用辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標(biāo)記的磷酸酪氨酸特異性單

4、克隆抗體(HRP-PY20)檢測(cè)磷酸酪氨酸殘基的酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA),以Src蛋白為篩選靶位點(diǎn)的蛋白酪氨酸激酶抑制劑體外快速篩選模型。再者,用硅膠柱層析、硅膠薄層層析等方法,分離純化中草藥白花蛇舌草,并從中篩選得到兩種具有明顯Src蛋白酪氨酸激酶抑制活性的成分。質(zhì)譜(MS)、紅外光譜(IR)、紫外光譜(UV)、核磁共振(<'1>H NMR、<'13>C NMR、

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