黑腹果蠅脫氧核苷酸激酶(Dm-dNK)基因作為新的自殺基因治療實(shí)體腫瘤.pdf

1、該研究目的就是在人體腫瘤細(xì)胞水平,評(píng)估黑腹果蠅膠氧核苷酸激酶能否在人類腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)細(xì)胞系并繼續(xù)保持高的催化活性,以及增強(qiáng)一系列的癌前藥物(核苷到類似物)的腫瘤殺傷效果,及其旁觀者效應(yīng);利用核苷酸還原酶抑制劑HU可以影響dNTPs池的特性,研究HU是否增強(qiáng)Dm-dNK/BVDU自殺基因系統(tǒng)的腫瘤殺傷力及旁觀者效應(yīng);利用標(biāo)記基因綠色熒光蛋白(GFP)及DNA復(fù)染,確認(rèn)Dm-dNK在人類腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)位點(diǎn),并試圖人工突變核信號(hào),改變其亞細(xì)

2、胞表達(dá)水平.同時(shí)比較Dm-dNK不同亞細(xì)胞位點(diǎn)表達(dá)時(shí)基細(xì)胞毒性和旁觀者效應(yīng)差別.為該基因作為新的更有效的自殺基因進(jìn)一步用于動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn),乃至早期臨床試驗(yàn)打下必要的基礎(chǔ).利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染腫瘤細(xì)胞,黑腹果蠅的脫氧核苷酸激酶(Dm-dNK)可以在人類腫瘤細(xì)胞中表達(dá)并繼續(xù)保持高的催化活性,在人類腫瘤細(xì)胞內(nèi),Dm-dNK可以有效初始磷酸化一系列嘧啶及嘌呤類核苷酸類似物,顯著提高這些核苷酸類似物的細(xì)胞毒性,并可引出旁觀者效應(yīng);核苷酸還析酶抑制