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文檔簡介
1、山東大學博士學位論文反義寡聚脫氧核苷酸抑制腦膠質瘤MDR1基因表達的實驗研究姓名:孔建新申請學位級別:博士專業(yè):外科學(神經外科)指導教師:張慶林2002.5.16山東人學博士學位論文。R N A 的剪接的特性,可在基因水平逆轉多藥耐藥。夕7 礦目的:研究多藥耐藥基因l ( M D R I ) 反義寡聚脫氧核苷酸對膠質瘤細胞系C 6 /a d r 中M D R l 基因表達的作用。f 方法:以用逐漸增加阿霉素藥物濃度聯合短期暴露法建立的
2、膠質瘤 L細胞株C 6 /a d r 作為膠質瘤體外耐藥模型。C 6 /a d r 細胞培養(yǎng)于含O .5 9 9 /m l阿霉素的R P M I1 6 4 0 培養(yǎng)液中以維持其耐藥性。針對M D R I 基因m R N A 的A U G 起始區(qū)合成反義和相應的正義寡聚脫氧核苷酸,均經硫代磷酸化修飾。反義寡聚脫氧核苷酸( M D R l 一A S )序列為:5 ' - C T C C A TC A CC A CC T C 一3 ’
3、,正義寡聚脫氧核苷酸( M D R 卜S ) 序列為:5 ’。G A G G T G G T G A T G G A G .3 ’。在脂質體L i p o f e c t i n 介導下,用M D R l 一A S 轉染C 6 /a d r 細胞,以M D R l 一s 同樣導入細胞為對照,利用形態(tài)學觀察和噻嘩藍快速比色法( M T T 法) ,觀測M D R l 一A S 對C 6 /a d r 細胞的毒性作用;利用逆轉錄聚合酶鏈反應
4、( R T —P C R ) 檢測M D R l 一A S 處理后的M D R lm R N A 的表達,并以B —a c t i n 為內參照進行定量比較;流式細胞術( F C M ) 分析P g p 的陽性細胞率。結果:觀察發(fā)現M D R I —A S 對C 6 /a d r 細胞無明顯毒性作用;R T —P C R結果發(fā)現M D R l ·A S 處理后M D R l /B .a c t i n 由處理前的1 0 6 %
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