2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗室從玉米中克隆得到四個與逆境相關的蛋白激酶基因(ZmSPKl,ZmPtil,ZmASKl,ZmSIMKl),受到鹽、甘露醇、脫落酸及低溫等脅迫因子誘導時表達上調,表明它們可能參與逆境信號傳導過程。為了進一步研究它們在體內的功能,我們利用生物信息學方法初步分析了它們在胞內可能的定位情況,然后利用綠色熒光蛋白基因gfp作為報告基因,構建融合基因的植物表達載體,采用花粉浸醮的方法,通過農桿菌介導轉入模式植物擬南芥中,觀察其在擬南芥細胞內

2、的定位,結果如下: 利用生物信息學軟件分析ZmPtil、ZmASKl、ZmSIMKl和ZmSPKl的初級結構,發(fā)現ZmPtil和ZmASKl的N末端都具有線粒體前導序列,均為可溶性蛋白,推測它們可能定位于線粒體基質內。ZmSIMKl和ZmSPKl定位情況較為復雜,初步推測它們可能是定位于細胞質和細胞核內。 構建了以35S啟動子驅動的四個融合蛋白ZmX-GFP和游離GFP的植物表達載體pGZmX-GFP和p

3、G35s-GFP。轉入擬南芥中均篩選得到穩(wěn)定轉化株系,用體式熒光顯微鏡觀察它們在組織器官內的熒光信號,發(fā)現它們在根尖、莖尖等幼嫩組織內表達量高。 激光共聚焦熒光顯微鏡觀測結果表明,融合蛋白ZmPtil-GFP的熒光信號主要分布在細胞質中,且分布不均勻,推測該蛋白激酶為可溶性蛋白,定位在特定的細胞器內。結合生物信息學分析及該細胞器大小,我們推測定位于線粒體內。融合蛋白ZmSPKl-GFP的熒光信號的分布與游離GFP對照相似

4、,在細胞基質及細胞核內均可見。但是與單獨表達GFP的對照相比,融合蛋白ZmSPKl-GFP在核內信號更強。據此,我們推測ZmSPKl是可溶性蛋白,定位在核內。 由于未得到熒光表達較強的轉ZmSIMKl融合基因和轉ZmASKl融合基因的株系,無法進行這兩個基因產物的精細定位。 蛋白質的細胞區(qū)域分布是其功能體現的一個方面,通過本實驗的研究為進一步研究它們在逆境信號傳遞中的作用,及其在植物體內可能的生物學功能奠

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